一种华重楼根茎的慢速冷冻保存方法

摘要

本发明公开了一种华重楼根茎的慢速冷冻保存方法，该方法采用了无任何毒副作用的脱脂奶粉作为保护剂，实现了以普通冰箱取代昂贵程序性降温仪来完成冷冻保存过程中的降温操作，从而大大地降低了材料的保存成本和对仪器设备的依赖性，并有效地简化了慢速冷冻保存方法的操作过程。本发明可使保存后的华重楼根茎存活率达到75～85％左右，实现了对华重楼根茎材料的绿色、高效保存。

主权项

一种华重楼根茎的慢速冷冻保存方法，其特征在于包括如下步骤：(1)预处理：取华重楼根茎，先在4～8℃条件下放置15～20天，然后切成5～20mm3的块状，再置于预培养液：蔗糖4～7％+脯氨酸0.2～0.5％中预培养20～24小时；(2)冷冻处理：将预培养后的华重楼根茎放入装有保护剂的冷冻管中，先置于2℃冰箱中放置30～40min，然后再移置于‑16℃的冰箱中并开始逐渐降温，待温度降至‑24℃后放置30～60min，随即迅速投入液氮中进行保存，所述保护剂为：脱脂奶粉30～40％+脯氨酸1.0～1.5％；(3)解冻以及洗涤：华重楼根茎在液氮中保存至少1周后，当需要使用根茎时，将冷冻管取出，迅速放入恒温培养箱内进行快速解冻，解冻完毕后，用0.4～0.5mol/L的蔗糖溶液进行浸泡洗涤3～4次，每次10～15min，最后用蒸馏水冲洗干净。