用于农药污染土壤修复的微生物固定化颗粒的制备方法

摘要

本发明涉及农药污染土壤的原位修复，具体的说是一种用于农药污染土壤修复的微生物固定化颗粒制备方法，即以多孔炭为主要载体材料，以纤维素、壳聚糖、海藻酸钠为辅助载体实现对微生物的固定，将得到的微生物固定化颗粒用于农药污染土壤的原位修复。本发明所用载体材料价格便宜，成本低，来源广泛，通气性良好，对生物无毒性，不会造成土壤的二次污染。该载体及其固定化工艺可用于假单胞菌属、芽孢杆菌属、动胶杆菌属、微球菌属等多菌种微生物的固定化，具有一定广谱适用性；芽孢杆菌可达到100亿个/克以上。与现有固定方法相比，本发明可将固定化细胞颗粒直接播撒到土壤中，不破坏原有土壤结构。

主权项

用于农药污染土壤修复的微生物固定化颗粒的制备方法，其特征在于采取以下步骤：a.载体材料的破碎与筛分：先将多孔炭粉碎成均匀颗粒，高温高压蒸汽灭菌，干燥备用；b.细菌斜面培养：在基础培养基中接入菌种，在28‑30℃温度下置于培养箱中斜面培养48小时；c.细菌种子液制备：用接种环在所述基础培养基上接取菌种，接入到液体种子培养基，放入摇床在温度28‑30℃条件下培养20‑24小时，制得细菌种子液；d.固定化颗粒制备：将培养了12‑14小时的所述细菌种子液与所述多孔炭颗粒按照重量5‑20％的比例混合，在30℃温度下振荡培养24‑48小时，然后加入质量浓度为2‑4％的羧甲基纤维素水溶液作为交联剂，经12‑18小时化学交联，然后将所述经过化学交联的多孔炭颗粒转移至剂质量浓度为1‑2％的壳聚糖水溶液中，进行一次加固反应22‑24小时，再将所述经过一次加固的多孔炭颗粒转移到质量浓度为2‑3％的海藻酸钠水溶液中，进行二次加固24小时，然后将所述经过二次加固的多孔炭颗粒用无菌水冲洗并浸泡24小时；e.增殖培养：将所述浸泡过的多孔炭颗粒取出接入增殖培养基中，放入摇床在温度28‑30℃条件下培养24小时，然后更换增殖培养基两次，每次重复增殖培养步骤，最终得到微生物固定化颗粒成品。