一种生物酶法生产塔格糖的方法

摘要

本发明公开了一种生物酶法生产塔格糖的方法，步骤是(1)构建L-阿拉伯糖同分异构酶(L-AI)工程菌大肠杆菌BL21(pET-15b/AI)；(2)利用构建的工程菌发酵获得含L-AI的细胞；(3)L-AI的分离纯化；(4)以L-AI催化D-半乳糖转化生产D-塔格糖；(5)选择可代谢D-半乳糖，而不代谢D-塔格糖的微生物代谢除去D-半乳糖，纯化获得D-塔格糖。本发明利用基因工程技术构建了高效表达L-AI的大肠杆菌工程菌，使L-AI得到了大量表达，拟补了该酶催化D-半乳糖转化生成D-塔格糖的效率较低的不足，同时利用可代谢D-半乳糖，而不代谢D-塔格糖的微生物除去酶催化反应后残留的底物半乳糖，得到了高纯度的D-塔格糖，具有重大的市场应用价值。

主权项

一种生物酶法生产塔格糖的方法，步骤是：(1)L 阿拉伯糖同分异构酶(L AI)工程菌大肠杆菌BL21(pET 15b/AI)构建；(2)利用构建的工程菌发酵获得含L 阿拉伯糖同分异构酶(L AI)的细胞；(3)L 阿拉伯糖同分异构酶(L AI)的分离纯化；(4)以L 阿拉伯糖同分异构酶(L AI)催化D 半乳糖转化生产D 塔格糖；(5)选择可代谢D 半乳糖，而不代谢D 塔格糖的微生物代谢除去D 半乳糖，纯化获得D 塔格糖；其特征在于：步骤(1)所述工程菌是克隆来源于Thermoanaerobacter mathranii的L 阿拉伯糖同分异构酶(L AI)基因araA，重组到表达载体pET 15b中，再转化到表达宿主大肠杆菌BL21中得到；步骤(2)所述工程菌发酵的温度为37℃，用0.5mmol/L的IPTG诱导表达L 阿拉伯糖同分异构酶；步骤(3)所述L 阿拉伯糖同分异构酶(L AI)的纯化选Ni NTA柱亲和层析纯化；步骤(4)所述以L 阿拉伯糖同分异构酶(L AI)催化D 半乳糖转化生产D 塔格糖的反应温度为60℃，反应pH值为8.0；步骤(5)所述可代谢D 半乳糖，而不代谢D 塔格糖的微生物选酿酒酵母菌。