一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法

摘要

本发明涉及一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法，属于生物工程技术领域。该方法步骤如下：将表达类胡萝卜素代谢相关酶的重组大肠杆菌菌体超声波破壁，然后加入相应的反应物质，超声波混匀，避光密闭振荡反应；再向混合液中加入10％SDS溶液，加入NaAc溶液，振荡离心，弃上清液，得蛋白质沉淀；向蛋白质沉淀中加入丙酮，搅拌，使沉淀均匀分散，然后经离心后，取上清液，滤膜过滤后，经检测，即得类胡萝卜素的丙酮溶液。本发明通过使类胡萝卜素与蛋白质共沉淀，将类胡萝卜素从大体积的体外反应溶液中浓缩到少量蛋白质沉淀中，从而减少了后续分离纯化过程。

主权项

一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法，步骤如下：(1)将表达类胡萝卜素代谢相关酶的重组大肠杆菌菌体超声波破壁，制得类胡萝卜素代谢相关酶粗酶液；(2)向步骤(1)制得的类胡萝卜素代谢相关酶粗酶液中加入相应的反应物质，反应体系用缓冲液定容后，超声波混匀，30℃避光密闭振荡反应1小时，得混合液；(3)向步骤(2)制得的混合液中加入1/15～1/10体积2mol/L NaOH和1/15～1/10体积10％SDS溶液，混合均匀；再加入混合液1/2体积3mol/L NaAc溶液，振荡5～10秒，离心，弃上清液，得蛋白质沉淀；(4)向步骤(3)制得的蛋白质沉淀中加入丙酮，搅拌1～2分钟，使沉淀均匀分散，得到含类胡萝卜素产物的丙酮溶液；(5)将步骤(4)制得的含类胡萝卜素产物的丙酮溶液经离心后，取上清液，滤膜过滤后，经检测，即得类胡萝卜素的丙酮溶液。