从生物材料中分离纯化RNA的方法

摘要

本发明公开了一种从生物材料中分离纯化RNA的方法，包括：(1)将组织器官和甲酰胺、单价阳离子盐水溶液混合，匀浆，得到脱水生物样品；(2)将脱水生物样品与单价阳离子盐水溶液混合，孵育；(3)加入起沉淀作用的单价阳离子盐水溶液，混匀，离心，将上清液倒入另一离心管中；(4)加入异丙醇，混匀，离心，倒掉上相液体、下相液体及介于两相间的残余杂质，得到白色RNA沉淀。本发明的方法能高效剥离生物样品中RNA上蛋白质，避免了产品中残存的蛋白质对产物RNA的分解作用；本发明所用试剂为低毒化合物，对环境和人体的危害小；且操作简便、操作人员不需专业的技术便可操作，设备简单、成本低廉，所得到的RNA得率和纯度都极高。

主权项

从生物材料中分离纯化RNA的方法，其特征是包括如下步骤：(1)用下述两种方法之一种制备脱水生物样品：方法一：将组织器官加入到体积比为1000∶0‑1000的甲酰胺与3M‑13.5M单价阳离子盐水溶液的混合液中，在0～25℃匀浆5s～20min，得到脱水生物样品；所述组织器官和所述混合液的比例为0.5～200mg∶1ml，所述组织器官为动物、植物或真菌的组织器官；方法二：将单细胞沉淀中加入到体积比为1000∶0‑1000的甲酰胺与3M‑13.5M单价阳离子盐水溶液的混合液中，在0～25℃悬浮或在0～37℃匀浆20s～20min，得到脱水生物样品；所述单细胞沉淀来自革兰氏阳性菌培养细胞、革兰氏阴性菌培养细胞、真菌培养细胞、动物培养细胞、植物培养细胞、血液细胞或精液细胞；(2)按体积比为200∶0～200，将所述脱水生物样品与3M‑13.5M单价阳离子盐水溶液混合或按体积比为160∶50∶40将所述脱水生物样品、3M‑13.5M单价阳离子盐水溶液和质量浓度为5％‑40％的十二烷基硫酸钠的甲酰胺溶液混合，在0～95℃孵育0.5～120min，在0～40℃放置0～10min；(3)按体积比为200∶400～1000向步骤(2)获得的产物中加入起沉淀作用的3.3M‑5M的单价阳离子盐水溶液，混匀，在4～25℃下，2000～16000g离心0.15～30min，将上清液倒入另一离心管中；(4)按体积比为900∶300～800的比例，向上清液中加入异丙醇，混匀，在4～37℃下，2000～16000g离心1～30min，倒掉上相液体、下相液体及介于上下两相之间的可见的残余杂质固体，得到位于离心管底部的白色RNA沉淀。