发明名称 |
从关节软骨中提取RNA的方法 |
摘要 |
本发明是对从关节软骨中提取RNA方法的改进,其特征是将软骨组织在-20℃及以下冷冻用粉碎机粉碎成粉末状;在粉碎的软骨组织中加入复合变性液制成匀浆,离心收集上清液;加入聚乙二醇辛基苯基醚蛋白变性剂,使其浓度为0.25-0.35%V/V,冰浴冷却,用苯酚-氯仿-异戊醇混合溶剂多次抽提上清液;加入乙酸铵或乙酸钠至最终浓度为0.3M,然后用异丙醇或乙醇沉淀RNA;对沉淀物用RNA纯化药盒进一步纯化。本发明方法从关节软骨中获得的RNA,得率高,纯度高,数量和质量都足以进行软骨细胞基因表达研究,得率较常规方法提高5-8倍,RNA260μm紫外吸收值/280μm紫外吸收值比值≥2,具有很高纯度,并RNA原有特性没有发生任何改变,解决了现有技术从软骨细胞中提取RNA得率低和纯度低的两大问题。 |
申请公布号 |
CN102250887A |
申请公布日期 |
2011.11.23 |
申请号 |
CN201110225851.2 |
申请日期 |
2011.08.08 |
申请人 |
刘军;王平;顾烽 |
发明人 |
刘军;王平;顾烽;顾大年;李则孝 |
分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
代理机构 |
宜兴市天宇知识产权事务所(普通合伙) 32208 |
代理人 |
史建群 |
主权项 |
从关节软骨中提取RNA的方法,其特征在于将软骨组织在‑20℃及以下冷冻用粉碎机粉碎成粉末状;在粉碎的软骨组织中加入复合变性液制成匀浆,离心收集上清液;加入聚乙二醇辛基苯基醚蛋白变性剂,使其浓度为0.25‑0.35% V/V,冰浴冷却,用苯酚‑氯仿‑异戊醇混合溶剂多次抽提上清液;加入乙酸铵或乙酸钠,然后用异丙醇或乙醇沉淀RNA;对沉淀物用RNA纯化药盒进一步纯化。 |
地址 |
214203 江苏省无锡市宜兴市经济开发区锦程大道11号创业园D10 |