一种微卫星文库筛选方法

摘要

本发明公开了一种微卫星文库筛选方法，该方法为：锚定PCR筛选含微卫星的阳性克隆；阳性克隆片段大小PCR检测；确定侧翼序列短的无效微卫星克隆与冗余克隆。与普通PCR筛选技术相比，本发明选用微卫星锚定引物比普通微卫星序列引物更能精确判定微卫星位置；与同位素杂交筛选技术相比，本发明则不受时间制约，技术简单易于掌握，且无危害性，同样由于锚定引物和扩增程序的独特优点使侧翼短的无效微卫星克隆最大程度淘汰掉。

主权项

1.一种微卫星文库筛选方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤A，锚定PCR筛选含微卫星的阳性克隆；a1，所述锚定PCR的扩增体系(10μl)为：a2，所述锚定PCR的扩增循环程序为：步骤B，阳性克隆片段大小PCR检测；b1，所述PCR检测扩增体系(10μl)为：b2，所述PCR检测的扩增循环程序为：步骤C，确定侧翼序列短的无效微卫星克隆与冗余克隆；确定侧翼序列短的无效微卫星克隆方法为：步骤A扩增筛选出阳性克隆，步骤B扩增该阳性克隆插入片段大小，步骤B扩增片段大小减去步骤A扩增片段大小即为所述微卫星一端侧翼序列长度；所述微卫星另一端侧翼序列的长度为步骤A扩增片段大小减去微卫星的重复区长度；若微卫星两侧序列都小70个碱基，所述微卫星则为无效克隆淘汰；确定所述冗余克隆的方法为：不同的阳性克隆间若步骤A扩增片段相同，步骤B扩增片段也相同，则这些克隆是同一个序列的可能性极大，只选其中一个克隆测序。