发明名称 |
手足口病LAMP检测试剂盒及其检测方法 |
摘要 |
本发明属生物技术领域,涉及一种用于检测手足口病主要病原体柯萨奇病毒A16型(Cox A16)和肠道病毒71型(EV71)的LAMP试剂盒及其建立方法和应用。该试剂盒包含检测柯萨奇病毒A16型四条LAMP引物的LAMP反应液和检测肠道病毒71型的四条LAMP引物的LAMP反应液。经检测验证,本发明试剂盒具有良好的特异性灵敏度,扩增快速、高效,且鉴定简便。本发明的检测体系在64℃等温条件下,能快速、方便、高效、高特异、高灵敏地检测到柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型,不需要复杂仪器,能较好满足对手足口病的临床检测,易于大范围推广应用。 |
申请公布号 |
CN102242223A |
申请公布日期 |
2011.11.16 |
申请号 |
CN201010170608.0 |
申请日期 |
2010.05.10 |
申请人 |
上海吉美生物工程有限公司 |
发明人 |
刘代新;刘军辉;李昂 |
分类号 |
C12Q1/70(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/70(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种手足口病病原体LAMP检测试剂盒,包含以下成分(1)病毒RNA提取试剂病毒RNA的抽提可以采用常规的Trizol法,也可使用各生物公司生产的病毒RNA抽提试剂盒。(2)LAMP检测反应液①反应液Cox A16‑用于检测柯萨奇病毒A16型含有以下成分:10x LAMP缓冲液(200mmol/L Tris‑HCl,100mmol/L KCl,20mmol/LMgSO4,100mmol/L(NH4)SO4,1.0%Tritonx‑100);100mmol/L MgSO4;25mmol/LdNTP;5mol/L betaine(甜菜碱);20umol/L引物CoxA16‑FIP;20umol/L引物CoxA16‑BIP;5umol/L引物CoxA16‑F3;5umol/L引物CoxA16‑B3;DEPC处理水。其中引物序列为:CoxA16‑FIP:5‑AAGTRGGTTTCGGAGCCCCTTTTTTAGCCAAACCCAATGGTGAG‑3CoxA16‑BIP:5‑TTYGCTTGGCARACTGCTACCATTTTAGGGGACTGACACTTGAGC‑3CoxA16‑F3:5‑ACATGCGCTTTGAYGCTGAA‑3CoxA16‑B3:5‑GCACTGGCTGGTGACATG‑3②反应液EV71‑用于检测肠道病毒71型10x LAMP缓冲液(200mmol/L Tris‑HCl,100mmol/L KCl,20mmol/LMgSO4,100mmol/L(NH4)SO4,1.0%Tritonx‑100);100mmol/LMgSO4;25mmol/LdNTP;5mol/L betaine(甜菜碱);20umol/L引物EV71‑FIP;20umol/L引物EV71‑BIP;5umol/L引物EV71‑F3;5umol/L引物EV71‑B3;DEPC处理水。其中引物序列为:EV71‑FIP:5‑CAACTTCCCCGGTGGGTGTGTTTTCCTACATGCGCTTTGATGCA‑3EV71‑BIP:5‑TATGTTTGTGCCACCTGGAGCCTTTTGGGGTTAGTGGCGGTTTG‑3EV71‑F3:5‑GCGCAAATGCGTAGAAAGG‑3EV71‑B3:5‑AGGGTCTGACAGCTTGACAA‑3③酶混合液包括Bst DNA聚合酶(8U/ul)和AMV逆转录酶(8U/ul) |
地址 |
200092 上海市杨浦区赤峰路65号同济科技园706室 |