一种在聚二甲基硅氧烷表面固定蛋白质的方法

摘要

本发明提供一种在聚二甲基硅氧烷表面固定蛋白质的方法，该方法首先在已固化的聚二甲基硅氧烷表面制备一层生物素化的聚二甲基硅氧烷薄膜；利用生物素-抗生物素蛋白、水溶性碳二亚胺化学以及3-巯基丙酸稳定的金纳米颗粒技术将蛋白质固定在聚二甲基硅氧烷表面；β-D-十二烷基-N-麦芽糖和牛血清白蛋白被分别用于封锁蛋白质在聚二甲基硅氧烷表面的非特异性吸附和在3-巯基丙酸稳定的金纳米颗粒表面处于激活状态的残余羧基基团。本发明的方法中，基于一个3-巯基丙酸稳定的金纳米颗粒表面含有多个羧基基团，可结合多个待固定蛋白质分子，将更多待固定蛋白质固定在聚二甲基硅氧烷表面，能有效提高后续ELISA检验的灵敏度。

主权项

一种在聚二甲基硅氧烷(PDMS)表面固定蛋白质的方法，其特征在于，首先将磷脂生物素加入到未固化的PDMS前聚体中，并涂布在一已固化的PDMS支撑层表面，固化后在PDMS支撑层表面形成一层生物素化的PDMS薄膜，接着依次用β‑D‑十二烷基‑N‑麦芽糖的磷酸盐缓冲溶液、包含有抗生物素蛋白的磷酸盐缓冲溶液、包含有1‑乙基‑3‑(3‑二甲氨基丙基)碳二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺的3‑巯基丙酸稳定的金纳米颗粒(MPA‑AuNPs)溶液浸泡所述PDMS薄膜表面，然后，用待固定蛋白质溶液浸泡所述PDMS膜表面，将待固定蛋白质固定在所述PDMS薄膜表面，最后用包含有1％牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲溶液浸泡固定所述PDMS膜表面。