一种利用鳞片组培快速繁殖欧洲水仙的方法

摘要

本发明涉及一种欧洲水仙鳞片组培快繁方法：以1～2年生的欧洲水仙的鳞片为外植体，经过诱导、分化、继代增殖、壮苗、生根和移栽等步骤，最终形成商品化的欧洲水仙种苗。本发明的方法针对性强，适用性好，操作简单易行，可使诱导增殖倍数高达10倍，生根率达95％以上，移栽成活率达95％以上，适宜在工厂化生产中应用。

主权项

一种欧洲水仙组织培养快速繁殖方法，该方法包括以下7个步骤：①外植体选择和处理：鳞茎低温处理后清洗干净，酒精和HgCl2消毒，剥开鳞片，切成小块；所述鳞茎选用1～2年生鳞茎；所述低温处理为在5～9℃的条件下处理30‑60d；所述酒精和HgCl2消毒过程为：鳞茎种球用70～75％(体积百分比)的酒精浸泡1～2min，用无菌水冲洗3～5次后去除上部约1/3鳞叶，再放入0.1～0.2％(质量百分比)HgCl2溶液中浸泡10～15min，再用无菌水冲洗3～5次；所述切成小块为将鳞片切割为(5～10)mm×(10～15)mm的块状；②愈伤组织诱导：将步骤①中经处理的无菌鳞片组织接种到愈伤组织诱导培养基中进行培养；所述愈伤组织培养基为MS+6‑BA0.5～2.5mg·L‑1+2，4‑D 0.1～1.0mg·L‑1+蔗糖25～35g/L+琼脂5.0～6.0g/L，pH5.6～6.0，培养温度25±3℃，光照度1000～1500lx，光照时间10～12h/d，培养20～30d；③不定芽或小鳞茎分化：将步骤②中培养得到的愈伤组织切成适当大小的块状，接种到分化培养基中进行培养；所述分化培养基为MS+6‑BA1.0～3.0mg·L‑1+NAA0.1～0.5mg·L‑1+蔗糖25～35g/L+琼脂5.0～6.0g/L，pH 5.6～6.0，培养温度25±3℃，光照度1500～3000lx，光照时间10～12h/d，培养25～45d；④继代增殖培养：将步骤③中诱导分化的小鳞茎或不定芽分切成2～3个一组，转接到继代增殖培养基中进行增殖培养；所述继代增殖培养基为MS+6‑BA 1.0～2.0mg·L‑1+NAA 0.1～0.5mg·L‑1+蔗糖20～30g/L+琼脂5.0～6.0g/L，pH 5.6～6.0，培养温度25±3℃，光照度1000～2000lx，光照时间10～12h/d，培养30～50d；⑤壮苗培养：将步骤④中获得的带叶小鳞茎分切为1～2个一组，转入壮苗培养基中进行培养；所述壮苗培养基为MS+6‑BA 0.5～1.5mg·L‑1+NAA0.3～1.0mg·L‑1+蔗糖20～30g/L+琼脂5.0～6.0g/L，pH 5.6～6.0，培养温度25+3℃，光照度1000～2000lx，光照时间10～12h/d，培养20～35d；⑥生根培养：将步骤⑤中获得的无根小鳞茎接种到生根培养基中进行生根诱导；所述生根培养基为MS+6‑BA0.1～0.5mg·L‑1+NAA0.3～1.0mg·L‑1+蔗糖20～30g/L+琼脂5.0～6.0g/L，pH 5.6～6.0，培养温度25±3℃，光照度1000～2000lx，光照时间10～12h/d，培养20～35d；⑦炼苗移栽：将步骤⑥中获得的生根苗经过室内炼苗后，从培养瓶中取出，移栽入适宜的基质中，一定时间后将移栽成活的幼苗移植于大田；所述室内炼苗过程为：组培瓶不开盖室内放置3～5d后，置于室内散射光处，2～3d后打开瓶盖，使生根苗上部暴露于空气中，3～4d后将小苗从培养瓶中取出，用水冲洗根部残留的培养基后移栽至基质中；所述基质配方为蛭石∶泥炭土∶园土＝1∶1∶2，基质需经过高压灭菌；移栽时应避免将小鳞茎完全埋入基质中，只需将根茎盘以下埋入基质即可，浇足水后，保持温度20～25℃，湿度85～90％，放置于阴凉处，每周浇水1次，35～45d后将移栽成活的幼苗移植于大田。