用于体细胞胚胎发生的低密度铺展方法

摘要

本发明涉及用于体细胞胚胎发生的低密度铺展方法。具体而言，本发明提供从前子叶胚胎生产针叶树子叶体细胞胚胎的方法，该方法包括下列步骤：(a)在足以至少浸没有孔材料表面的体积的无菌稀释培养基中，将多个前子叶胚胎分配至水平置于无孔表面上的有孔材料上，由此均匀地散布前子叶胚胎；(b)从有孔材料去除无菌稀释培养基，从而将均匀散布的前子叶胚胎截获在有孔材料上；以及(c)将截获在有孔材料上的前子叶胚胎与发育培养基接触足以生成针叶树子叶体细胞胚胎的时段。

主权项

生产针叶树子叶体细胞胚胎的方法，所述方法包括：a)通过将多个针叶树前子叶胚胎悬浮在足以至少浸没有孔材料表面的体积的无菌稀释培养基中，并将无菌稀释培养基中的针叶树前子叶胚胎分配至有孔材料上，将多个针叶树前子叶胚胎以每平方英寸有孔材料小于0.1g细胞湿重的密度均匀地分配至有孔材料上，其中有孔材料包含平均孔径范围在5微米至1200微米的孔，并且其中有孔材料水平置于无孔表面上；b)从有孔材料去除无菌稀释培养基，从而在有孔材料上截获均匀散布的针叶树前子叶胚胎；以及c)将截获在有孔材料上的针叶树前子叶胚胎与发育培养基接触至足以生成针叶树子叶体细胞胚胎的时间。