发明名称 |
一种微囊藻毒素荧光标记的方法 |
摘要 |
本发明提供了公开了一种微囊藻毒素荧光标记的方法,其步骤:A、在pH的充氮气保护并室温震荡下,将微囊藻毒素与半胱氨酸以摩尔比在5%的K2CO3溶液中反应,得到微囊藻毒素的半胱氨酸衍生物;B、通过色谱仪并设置条件进行纯化,除去反应液中过量的半胱氨酸,得到纯化的MC-Cys;C、将纯化后的MC-Cys与异硫氰酸荧光素以摩尔比在硼酸盐缓冲液中反应,在室温下振荡反应,得到偶联FITC的藻毒素;D、通过色谱仪并设置条件进行纯化,除去反应液中过量的FITC,得到纯化的MC-Cys-FITC。方法易行,操作简便,使用半胱氨酸作为中间连接体将微囊藻毒素和异硫氰酸荧光素连接,对微囊藻毒素进行荧光标记。得到纯度为95%的MC-Cys-FITC,为微囊藻毒素毒理学方面的研究提供直接实验证据。 |
申请公布号 |
CN102241753A |
申请公布日期 |
2011.11.16 |
申请号 |
CN201110117032.6 |
申请日期 |
2011.05.06 |
申请人 |
深圳大学 |
发明人 |
黎双飞;刘芳;周连宁;胡章立;吴锦霞;谢艳梅 |
分类号 |
C07K14/405(2006.01)I;C07K1/13(2006.01)I |
主分类号 |
C07K14/405(2006.01)I |
代理机构 |
武汉宇晨专利事务所 42001 |
代理人 |
王敏锋 |
主权项 |
一种微囊藻毒素荧光标记的方法,其步骤是:A、在pH9‑13的充氮气保护并室温震荡的条件下,将微囊藻毒素与半胱氨酸以1:20的摩尔比在5%的K2CO3溶液中反应9‑11 h,得到微囊藻毒素的半胱氨酸衍生物; B、通过高效液相色谱仪并设置一定的制备色谱条件进行纯化,除去反应液中过量的Cys,得到纯化的MC‑Cys; C、将纯化后的MC‑Cys与异硫氰酸荧光素以1:2的摩尔比在硼酸盐缓冲液中反应,pH 8.5‑9.5,在室温下振荡反应9‑11 h,得到偶联FITC的藻毒素MC‑Cys‑FITC; D、通过高效液相色谱仪并设置一定的制备色谱条件进行纯化,除去反应液中过量的FITC,得到纯化的藻毒素‑半胱氨酸‑异硫氰酸荧光素的偶合物;所述的(B)步骤制备色谱条件是:流动相:A:H2O+0.1% TFA;B:ACN+0.1% TFA,流速:15 mL/min,检测波长:238 nm,进样量30 mL,检测器:可见紫外分光检测器,制备柱: XTerra Prep MS C18 Column,HPLC色谱分离梯度条件是:时间/min 流动相A% 流动相B%O 90 105 72 288 70 308.5 70 309 10 9010 10 9010.5 90 10所述的(D)步骤制备色谱条件是:流动相:A:25 nM乙酸铵;B:CAN,流速:15 mL/min,检测波长:238 nm,进样量30 mL,检测器:可见紫外分光检测器,制备柱: XTerra Prep MS C18 Column,HPLC色谱分离梯度条件是:时间/min 流动相A% 流动相B%O 90 105 74 2612 70 3012.5 70 3013 10 9014 10 9014.5 90 10。 |
地址 |
518060 广东省深圳市南山区南海大道3688号 |