一种3群霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒及系统鉴定方法

摘要

本发明提供了一种根据3群霍乱弧菌的蔗糖、阿拉伯糖、甘露糖、氧化酶、粘丝、无盐胨水等典型生化特征发明一个快速检测方法及检测过程中所用的荧光PCR检测试剂盒。本发明根据外膜蛋白基因(ompW)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)和溶血素基因(hlyA)设计引物和TaqMan探针，霍乱弧菌外膜蛋白基因作为鉴定霍乱弧菌的特征性基因，其他两种基因作为甄别霍乱弧菌携带的毒素基因，通过上述三个基因提供一种检测霍乱弧菌及其相关毒素基因的荧光检测方法。通过上述生化反应对菌株进行初筛，结果均为阳性的菌株用荧光定量PCR进行确认，ompW基因阳性的为霍乱弧菌。通过上述生化反应及荧光定量PCR可实现对霍乱弧菌及其相关毒素基因的快速、准确、特异检测。

主权项

一种3群霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒，主要包括外膜蛋白基因(ompW)特异性引物和荧光探针、PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷混合物和DNA聚合酶，其特征在于所述特异性引物和荧光探针如下：ompW上游引物：5′‑TCCTCAACGCTTCTGTGTGGTAT‑3′ompW下游引物：5′‑ATTGATTTCAACATCCGTGGATT‑3′ompW荧光探针：5′‑FAM‑TGA AAC AAC GGC AAC CTA CAA AGCAGG‑BHQ1‑3，其中FAM为荧光报告基团，BHQ1为荧光淬灭基团。