主权项 |
一种检测及/或定量对人类细胞具有免疫调节活性之β-葡聚醣的方法,其包含以下步骤:(a)提供于细胞表面上稳定表现人类dectin-1分子且不表现其他葡聚醣受体之测试细胞株、测试标靶、与人类dectin-1分子特异性结合之标记物β-葡聚醣及各种已知量之与人类dectin-1分子特异性结合之标准β-葡聚醣;其中该测试细胞株为经人类dectin-1基因转形之转形细胞株且源自肾;及该标记物β-葡聚醣具有β1,3及β1,6键联;(b)使该测试标靶及特定量之该标记物β-葡聚醣,与该测试细胞株在测试混合物中接触,以使该标记物β-葡聚醣或若存在于该测试标靶中对人类细胞具有免疫调节活性之β-葡聚醣,与该测试细胞株形成复合物;其中该标记物β-葡聚醣之特定量系使该测试细胞株饱和;(c)使该特定量之标记物β-葡聚醣与该测试细胞株在参考混合物中接触,以使该标记物β-葡聚醣与该测试细胞株形成复合物;及使各种已知量之该标准β-葡聚醣及该标记物β-葡聚醣与该测试细胞株在各种标准混合物中接触,以使该标记物β-葡聚醣及该标准β-葡聚醣与该测试细胞株形成复合物;(d)移除在(b)中之该测试混合物及(c)中之该参考混合物中,不与该测试细胞株形成复合物之该测试标靶及该标记物β-葡聚醣;及移除在该等标准混合物中不与该测试细胞株形成复合物之该标准β-葡聚醣及该标记物β-葡聚醣;(e)检测该测试混合物及该参考混合物中之该标记物β-葡聚醣之量;及检测该等标准混合物中之该标记物β-葡聚醣之量,及获得该标准β-葡聚醣之量相对于该标记物β-葡聚醣之量的回归曲线;及(f)比较该测试混合物中与该参考混合物中之该标记物β-葡聚醣之量,其中当该测试混合物中之该标记物β-葡聚醣之量小于该参考混合物中之该标记物β-葡聚醣之量时,则将该测试标靶监定为含有该对人类细胞具有免疫调节活性之β-葡聚醣;及藉由比较该测试混合物中之该标记物β-葡聚醣之量与步骤(e)中之该回归曲线,以定量对人类细胞具有免疫调节活性之该β-葡聚醣的量。 |