一种快速获取特异性人源抗体可变区基因序列的方法

摘要

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种快速获取特异性人源抗体可变区基因序列的方法及其制备全人源抗体的方法。本发明所涉及的过程简单、快速、有效，从分离CD19阳性淋巴细胞到获取特异性抗体的可变区基因序列，整个过程不超过14天。本发明提供了一个良好的技术平台，可广泛用于获取多种传染性/感染性、肿瘤性疾病、自身免疫性疾病中特异性的全人源化抗体的核心成分重链和轻链的可变区，特别是某些突发、重大流行性疾病，如SARS、禽流感等疾病，并且本发明为全人源化抗体药物的生产提供了一个有效手段。

主权项

一种快速获取特异性人源抗体可变区基因序列的方法，其包括下列步骤：a)从供体外周血或细胞系中分离CD19阳性的淋巴细胞；b)CD19阳性的淋巴细胞体外诱导分化；c)检测特异性抗体和筛选特异性抗体阳性的淋巴细胞；d)设计兼并引物群；e)采用单细胞RT PCR的方法来扩增可变区基因并测序；其中所述CD19阳性的淋巴细胞体外诱导分化步骤为将CD19阳性的淋巴细胞体以单个细胞形式在存在CD40L蛋白情况、细胞因子的培养液中培养。