表达人类血管紧张素II受体I反义基因的重组腺相关病毒及其制备方法

摘要

一种表达人类血管紧张素II受体I反义基因的重组腺相关病毒(rAAV)，它适用于高血压、心力衰竭、肾脏疾病及其他相关疾病的基因治疗，该载体系统包括包装质粒pXX2，辅助质粒pXX6，真核表达载体pXXUF3内插入了人类血管紧张素II受体I反义基因编码序列。该重组腺相关病毒由天然状态的腺相关病毒经分子生物学方法人工剪切、修饰和加工，再经分子生物学方法包装复制，并经纯化而成。

主权项

一种表达人类血管紧张素II受体I反义基因的重组腺相关病毒，该重组腺相关病毒由质粒pXX2、pXX6和pXXUF1‑ATR1‑AS共转染293细胞制备，其中：pXX2为包装质粒，具有图6A所示结构，含有编码腺相关病毒Rep蛋白和Cap蛋白的编码序列，并在上游和下游各插入一个p5启动子；pXX6为辅助质粒，具有图6B所示结构，删除了腺病毒的致病基因序列，保留了腺病毒E2A、E4和VA编码区基因；pXXUF1‑ATR1‑AS具有图9所示结构，由图7所示的含腺相关病毒基因组的真核表达载体pXXUF1中腺相关病毒缺失cap蛋白和rep蛋白编码区，并插入人类血管紧张素II受体I反义基因，形成该重组质粒pXXUF1‑ATR1‑AS。