一种霍山石斛水溶性提取物的制备方法

摘要

本发明涉及霍山石斛水溶性提取物的制备方法。该方法包括以下操作步骤：（1）、将新鲜霍山石斛或霍山石斛组织培养物预处理；（2）、加压浸提得到霍山石斛浓缩液；（3）、醇沉得到霍山石斛沉淀物；（4）、温度控制脱蛋白；（5）、超滤浓缩收集浓缩液A；（6）、纯化得到浓缩液C；（7）、干燥得到霍山石斛水溶性提取物。本发明方法具有如下优点：（1）本发明弥补了霍山石斛活性成分制备方法的不足，提供了霍山石斛水溶物组分的制备方法；（2）本发明的制备方法工艺简单，适于规模化生产；（3）本发明的制备方法通过温度调节控制脱蛋白，避免了有机溶剂脱蛋白易造成产品中有机溶剂残留问题，将拓展霍山石斛在保健品、药品等领域的应用。

主权项

一种霍山石斛水溶性提取物的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：（1）、预处理：取霍山石斛或霍山石斛组织培养物，粉碎；将粉碎的霍山石斛或霍山石斛组织培养物用有机溶剂回流2～3次，于温度30～50℃放置6～10小时，使有机溶剂挥发、去除，得到霍山石斛药渣；（2）、加压浸提：取霍山石斛药渣，放入提取浓缩机组中，按料液质量比1︰5～1︰25加入蒸馏水，于温度50～70℃、压力0.04～0.08Mpa条件下提取2～3次，每次0.5～1小时；将每次提取结束得到的提取液打入浓缩釜中，浓缩到浓缩液体积与霍山石斛药渣质量的比例为1毫升: 2～5克，得到霍山石斛浓缩液；（3）、醇沉：取霍山石斛浓缩液，加入乙醇，使乙醇体积百分数达到70～80%，温度4‑10℃静置24～48小时，于温度4℃、转速10000 r/min条件下离心10分钟，沉淀物即为霍山石斛沉淀物；（4）、温度控制脱蛋白：取霍山石斛沉淀物溶于蒸馏水中，沉淀物和蒸馏水的质量体积比为1: 4～6，得到霍山石斛提取物溶液；霍山石斛提取物溶液在温度100℃条件下脱蛋白5分钟，于温度4℃、转速10000 r/min离心10分钟，除去蛋白，收集离心上清液；（5）、超滤浓缩：取所述离心上清液，用截留分子量为2000～5000 Da的超滤膜浓缩，同时除单糖及寡糖等小分子杂质，收集浓缩液A；（6）、纯化：将浓缩液A通过高效阴离子DEAE‑纤维素‑52交换树脂柱，用蒽酮比色法跟踪检测流出液，收集去离子水洗脱部分的主峰流出液；主峰流出液用截留分子量为2000～5000 Da的超滤膜浓缩，同时除单糖及寡糖等小分子杂质，收集浓缩液B；将浓缩液B通过生物凝胶聚丙烯酰胺葡聚糖‑200色谱柱，用蒽酮比色法跟踪检测流出液，收集去离子水洗脱部分的主峰流出液；主峰流出液用截留分子量为2000～5000 Da的超滤膜浓缩，同时除单糖及寡糖等小分子杂质，收集浓缩液C；（7）、干燥：将浓缩液C冷冻干燥，即得到霍山石斛提取物。