一种增强的磁珠法核酸提取方法

摘要

当前的磁珠法核酸提取方法有两方面不足：首先是RNA的提取效率较低；其次是核酸提取步骤繁多，裂解与结合分为两步，磁珠在裂解完成之后才能加入溶液中结合核酸，不利于全自动化应用。本发明提供一种增强的磁珠法核酸提取方法，其特征在于核酸提取仅需4个步骤，分别是裂解与结合、清洗1、清洗2、洗脱，而前3个步骤都通过加入异丙醇增强了溶液中磁珠吸附核酸的作用，从而增强了磁珠法核酸提取的效率，在应用于RNA提取时提供了一种高效提取RNA的方法。本发明的特征还在于，裂解与结合一步完成，在应用于自动化核酸提取时每一步骤的反应试剂可以预先灌装入该步骤对应的反应舱内，使本发明更适用于全自动化应用。

主权项

一种增强的磁珠法核酸提取方法，其特征在于，它包括步骤：(1)裂解与结合：将“N”μl生物样品(10≤“N”≤2000)加入到包含“2N”μl裂解液、“0.25N”μl蛋白酶K溶液、“N”μl磁珠‑异丙醇溶液(0.3～0.7mg磁珠溶于100μl异丙醇)的1.5ml离心管中，充分混匀，室温放置8～10min，使细胞、病毒裂解并释放其中的核酸、蛋白质，蛋白质在蛋白酶K的作用下降解，游离的核酸在裂解液中高浓度盐和异丙醇作用下吸附到磁珠表面，最后通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁，吸弃离心管内溶液；(2)清洗1：在离心管内加入“4N”μl含异丙醇的洗涤液A(“2N”μl洗涤液A+“2N”μl异丙醇)，充分混匀，第一次清洗磁珠，通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁，吸弃离心管内溶液；(3)清洗2：在离心管内加入“4N”μl含异丙醇的洗涤液B(“2N”μl洗涤液B+“2N”μl异丙醇)，充分混匀，第二次清洗磁珠，通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁，吸弃离心管内溶液；(4)洗脱：在离心管内加入“0.2N～2N”μl洗脱液，充分混匀，56℃加热洗脱3～5min，使核酸从磁珠表面解吸附并进入洗脱液中，通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁，转移洗脱液至新的离心管内，即为提取好的核酸。