一种导致烟草青枯病的茄科雷尔氏菌高纯培养物制备和保存方法

摘要

本发明公开了一种导致烟草青枯病的茄科雷尔氏菌高纯培养物制备和保存方法，将烟草青枯病典型症状的病株茎秆处置后，27～30℃无菌保湿培养12～24小时，获得含茄科雷尔氏菌培养物；经过TTC法鉴定、筛选含菌量在80％以上的高纯培养物；所获得的高纯培养物可采用保存液A在-20～-40℃恒温保存，或采用保存液B在20℃恒温保存；保存液A为100～200mL甘油和20～40g脱脂奶粉，加入蒸馏水溶解、定容至500mL，摇匀，常规灭菌后制得；保存液B是将1～2g的琼脂加入至1000mL蒸馏水中融化、摇匀，常规灭菌后制得。本发明的制备和保存方法简便、易行，目标菌纯度高、性状稳定，保存效果好。

主权项

一种导致烟草青枯病的茄科雷尔氏菌高纯培养物的制备方法，其特征是采取以下步骤：A、原料的制备：选具有烟草青枯病典型症状的病株茎秆用自来水洗净，经75％的酒精表面消毒2～3分钟后，用无菌水冲洗2～3次，然后在无菌条件下将病株茎秆截成3～5cm的小段；B、保湿培养：在27～30℃下，将病株茎秆小段的截口暴露于灭菌蒸馏水外，无菌保湿培养12～24小时，有浓稠状液体从截口处流出，浓稠状液体为含茄科雷尔氏菌培养物；C、选择高纯培养物：采用半选择TTC法进行培养测定，用移菌环取B步骤所得的浓稠状液体，以含有0.1％吐温‑80、pH值为6.8的灭菌磷酸缓冲液10倍系列稀释后，涂布于直径9～10cm半选择TTC平板培养基上，27～30℃无菌培养3～4天后，选择含有80～120个菌落的培养基，且有环状螺纹、边缘白色中央粉红色的较大菌落占总菌落数80％以上的，即接种到该培养基上的浓稠状液体为含菌量在80％以上的含茄科雷尔氏菌高纯培养物。