双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒及应用

摘要

本发明提供了一种双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒，包括脱氧三磷酸核苷混合物，MgCl2，RNA酶抑制剂，莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶，DNA聚合酶、流感病毒标准品、对照品。本发明是在目前流行的甲型H1N1流感病毒序列分析的基础上，提供的一种多重荧光定量PCR的分子生物学快速、特异、准确、灵敏的基因诊断方法与诊断试剂盒，可以1个反应管2个小时同时检测区别甲型流感病毒或乙型流感病毒，完善流感检测。

主权项

一种双重荧光定量RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含荧光定量RT‑PCR反应液，甲型流感病毒标准品、乙型流感病毒标准品、对照品，其中荧光定量RT‑PCR反应液含RT‑PCR反应缓冲液、两种病毒通用引物、相应的两种荧光探针和酶混合物，所述RT‑PCR反应缓冲液含氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，酶混合物含RNA酶抑制剂、莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶和耐热DNA聚合酶，所述双重荧光定量RT‑PCR检测试剂盒的上下游引物和特异性探针序列如下：上游引物甲型infA‑FP: 5’‑ GACCRATCYTGTCACCTCTGAC‑3’下游引物甲型infA‑RP: 5’‑AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA‑3’特异性探针甲型infA‑P: 5’‑TGCAGTCCTCGCTCACTGGGCAC‑3’上游引物乙型‑FP: 5’‑CCCACCRAGCAACAAACG‑3’   下游引物乙型‑RP: 5’‑CCTTCCGACATCAGCTTCACT‑3’     特异性探针乙型‑P : 5’‑CCCGGAACCCATCCCCGGA‑3’ ；甲型流感病毒标准品：Gaccaatcttgtcacctctgactaagggaattttaggatttgtgttcacgctcaccgtgcccagtgagcgaggactgcagcgtagacgctttgtccaaaatgccct乙型流感病毒标准品：Cccaccaagcaacaaacgaacccggaacccatccccggaaagagcaactacaagcagtgaagctgatgtcggaagg  。