高水平表达蛋白质的宿主细胞的选择

摘要

本发明提供了包含多顺反子转录单位的DNA分子，其编码i)在真核宿主细胞中有功能的可选择标记多肽，及编码ii)感兴趣的多肽，所述感兴趣的多肽具有与可选择标记多肽分离的翻译起始序列，特征在于所述感兴趣的多肽的编码序列位于所述多顺反子转录单位中可选择标记的编码序列的下游，编码可选择标记多肽的核酸序列包含降低可选择标记在真核宿主细胞中的翻译效率的突变。本发明还提供了获得表达感兴趣的多肽的宿主细胞的方法，所述宿主细胞包含本发明的DNA分子。本发明进一步提供了感兴趣的多肽的产生，包括培养包含本发明DNA分子的宿主细胞。

主权项

一种包含双顺反子转录单位的DNA分子，其编码：i)能在真核宿主细胞中选择的可选择标记多肽，及编码ii)感兴趣的多肽，所述感兴趣的多肽具有与可选择标记多肽分离的翻译起始序列，特征在于：(i)感兴趣的多肽的编码序列在所述双顺反子转录单位中位于可选择标记编码序列的下游，(ii)编码可选择标记多肽的序列在从可选择标记多肽的起始密码子之后直至感兴趣的多肽的起始密码子的编码链中无ATG序列，(iii)编码可选择标记多肽的编码链中的翻译起始序列，所述翻译起始序列包含选自以下序列组成的组中的起始密码子：a)在翻译起始的非最佳前后序列中的ATG起始密码子，包含序列(C/T)(A/T/G)(A/T/G)ATG(A/T/C)，后接间隔序列，其中所述间隔序列不含有二级结构，其中所述起始密码子加下划线；b)GTG起始密码子；和c)TTG起始密码子。