重组猪α型干扰素的制备方法

摘要

本发明公开了一种重组猪α型干扰素的制备方法，系将特异性引物PCR扩增猪α型IFN的目的基因，与表达载体pET-28a和与表达载体pGEX-5X进行连接，转化大肠杆菌，使其高效表达猪α型干扰素，经高度纯化后除菌、分装和冻干等工艺制成重组猪α型IFN冻干粉针剂。本发明经过安全性实验、IFN效力检验、临床试用，表明其对猪病毒性腹泻和流行性感冒等有明显的治疗效果，且在安全性和治愈率上优于同类产品。本发明制备工艺简单，易于工业化生产，经冻干后易运送和保藏。重组猪α型干扰素注射猪机体后，具有疗效好、安全可靠和无毒副作用等特点可用于治疗猪病毒性腹泻和流行性感冒等疾病，是一种新型高效安全无残留的广谱抗病毒制剂。

主权项

1.重组猪α型干扰素的制备方法，其特征是进行以下步骤：(1)、构建克隆载体目的基因为：TCACTCCTTCTTCCTGAGTCTGTCTTGCAGGTTTGTGGAGGAAGAGAAGGCTCTCATGACTTCTGCCCTGACGATCTCCCAGGCACAGGGGCTGTAGCTCTTCTCTTGCAGATAGAGGGTGAGTCTGTGGAAGTATTTCCTCACAGCCAGGATGGAGTCCTCCTCCAGCAGGGGGGTCCCTTCCAGCCCGGCCTCCTGCATGACACAGGCTTCCAGGTCCCTGAGCTGCTGATCCAGTCCAGTGCAGAACTGGTGCAGGAGGCTCTCATCCCAGGCAGCAGCCGAGCCCTCTGTGCTGAAGAGCTGGAAGGTCTGCTGGAGCATCTCATGCACCAGAGCCATGGCTTGAGCCTTCTGGACCTGGTTGCCCCCCAAGGCCTCTTGGAATCCAAAGTCCCTTCTGTGGTCCAGGCAGGAGAAGGGGGAGATTCTCCTCATTTGTGCCAGGAGCCTCAGGGCCCTGGTGTGAGCCAGGCTGTGGGTCTGAGGCAGGTCGCA特异性引物：上游：GAATTC TGCGAC CTGCCT CAGACC CA            下游：CTCGAG TCACTC CTTCTT CCTGAG TC克隆载体：pMD18-T simple vector(2)、构建表达载体表达载体：pET-28a，或者pGEX-5X(3)、重组蛋白的表达挑取载体构建成功的重组表达菌进行扩增、放大培养，并加入诱导剂低温诱导表达；(4)、鉴定重组蛋白应用抗α型干扰素参考血清做中和实验，证明型别无误；(5)、纯化重组蛋白，得到粗制品干扰素。