通过VP7基因快速检测A组轮状病毒G基因型的新方法

摘要

本发明提供的通过VP7基因高效快速检测A组轮状病毒G基因型的新方法，包括1)设计能特异性扩增A组轮状病毒不同G基因型的六条核苷酸序列，作为检测不同G基因型的引物。2)提取样本中的病毒核酸，利用六条引物进行一次性RT-PCR扩增，将产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，溴化乙锭染色，以凝胶成像拍照。3)当PCR产物大小分别为332bp、600bp、98bp、471bp和248bp时，分别表示该样本中含有G1型、G2型、G3型、G4型和G9型轮状病毒，建立了A组轮状病毒G基因型的判断标准。

主权项

通过VP7基因快速检测A组轮状病毒G基因型的新方法，其特征在于：包括设计能特异性扩增不同G基因型的六条核苷酸序列，作为检测不同基因型的引物，引物分别为：①：5′‑gctccttttaatgtatggtattg‑3′；②：5′‑taagaaacatttgcgataatgag‑3′；③：5′‑ggacaaacttttaccgtacagtc‑3′；④5′‑ttctagttaaggatttgagtacg‑3′；⑤5′‑tcagatatgtccaactcctcacc‑3′；⑥5′‑ttgaagtcaaaaacgtttcttgc‑3′。引物长度均为23bp，将其结合到轮状病毒VP7基因的模板上，可特异性的扩增出大小不同的目的序列。3)在待测样品中加入200uL的PBS，然后进行3000g的离心力离心30秒，吸取上清，采用病毒核酸提取试剂盒分离RNA。4)取5ul的分离的RNA，加入10pmol引物①，引物②、引物③、引物④、引物⑤和引物⑥分别加入2pmol，然后加入混合试剂，采用一步法进行RT‑PCR扩增。5)将PCR产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，用溴化乙锭染色，以凝胶成像确定已扩增的目的条带根据扩增的片断大小来判断轮状病毒的G基因型，提供预防治疗和研究的依据。