主权项 |
提取纯化DNA的方法,包括以下步骤:1)预处理:用预处理裂解液裂解生物样品,得到粗裂解液,所述生物样品是唾液;其中,预处理裂解液:pH为8.0,溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:50mM Tris‑HCl,3g/100ml的十二烷基磺酸钠SDS,50mM的CDTA和100mM的NaCl水溶液,0.2mg/ml的蛋白酶K;2)核酸吸附:将步骤1)得到的粗裂解液与裂解结合液以及磁珠悬浮液混合,形成含有磁性纳米微球‑DNA的复合体的溶液体系,收集所述溶液体系中的磁性纳米微球‑DNA的复合体;其中,裂解结合液:pH为7.0,溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:100mM的Tris‑HCl,5M的异硫氰酸胍,5%(体积百分比)的Triton X‑100,2g/100ml的3‑(3‑胆胺丙基)‑二甲氨基‑1‑丙磺酸,50mM的EDTA以及20%(体积百分比)的乙醇;磁珠悬浮液:每ml磁珠悬浮液中的纳米级硅包被磁性微球为50mg,其余为水,纳米级硅包被磁性微球的直径是200nm;3)洗涤:将步骤2)得到的磁性纳米微球‑DNA的复合体依次用洗涤液I、洗涤液II洗涤,然后用洗脱液溶出DNA,得到纯化的DNA;其中,洗涤液I:溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:5M的盐酸胍,35%(体积百分含量)的乙醇和50mM的EDTA。洗涤液II:75%(体积百分含量)乙醇水溶液。洗脱液:是TE溶液,所述TE溶液的pH为8.0,溶剂是水,溶质是10mM的Tris‑HCl,1mM的EDTA。 |