| 发明名称 | 一种重组抗菌肽及其基因工程制备方法和应用 | ||
| 摘要 | 本发明提供一种重组抗菌肽工程菌的制备方法及其应用，属于生物基因工程技术领域，包括抗菌肽基因的扩增，基因克隆，啤酒酵母转化，重组蛋白的高效表达和纯化。本发明的重组抗菌肽为猪源抗菌肽Cathelicidins家族PAMP-36，其蛋白含有如序列工D No.2所示的短肽。本发明制得的重组抗菌肽可用于生产饲料添加剂、兽药、防腐剂，以及用于制备革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌，真菌或病毒感染引发的疾病的药物。 | ||
| 申请公布号 | CN102220255A | 申请公布日期 | 2011.10.19 |
| 申请号 | CN201010151996.8 | 申请日期 | 2010.04.14 |
| 申请人 | 深圳市圣西马生物技术有限公司 | 发明人 | 彭永鹤;李永新;林美娟 |
| 分类号 | C12N1/19(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C07K14/47(2006.01)I;A23K1/16(2006.01)I;A23L3/3526(2006.01)I;A01N63/04(2006.01)I;A61K38/17(2006.01)I;A01P1/00(2006.01)I;A01P3/00(2006.01)I;A61P31/04(2006.01)I;A61P31/10(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I;A61P33/02(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;C12R1/865(2006.01)N | 主分类号 | C12N1/19(2006.01)I |
| 代理机构 | 代理人 | ||
| 主权项 | 1.重组抗菌肽PMAP-36的工程菌以及产物的制备方法，其特征在于其操作步骤为：A.PMAP-36基因的获得和扩增：参照<img file="FSA00000083192700011.GIF" wi="169" he="52" />LS(Invitrogen)试剂盒说明书，从母猪的股骨骨髓中提取基因组RNA。在人工合成引物的存在下，通过RT-PCR获得编码PMAP-36的基因片段。B.基因克隆和转化大肠杆菌：回收PCR产物，用T4连接酶与PMD18-T载体连接。转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，经抗性培养基筛选后，获得具有正确编码序列的PMAP-36基因。C.酿酒酵母表达载体构建和转化：分别用限制性内切酶XbaI和HindIII双酶切重组质粒和酵母穿梭质粒pVT102U/α。回收酶切产物，用T<sub>4</sub>DNA连接酶连接，构建重组表达质粒PVT-PMAP36，用电转的方法转入酿酒酵母S78，获得阳性转化子S78-PMAP36。D.将工程菌扩大培养，纯化蛋白： | ||
| 地址 | 518057 广东省深圳市南山区高新中四道31号研祥科技大厦10楼B1-B2单元 | ||