酵母展示脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯的方法

摘要

本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯的方法，包括：将维生素E和琥珀酸酐溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得维生素E琥珀酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成维生素E琥珀酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。

主权项

一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯的方法，包括：将维生素E和琥珀酸酐溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得维生素E琥珀酸酯；所述的酵母展示脂肪酶通过如下方法制备：将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；所述的重组质粒由原始载体pPIC9K和依次插入原始载体pPIC9K中MFα1信号肽下游的脂肪酶基因和毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因组成。