一种利用RNA干扰技术防治烟粉虱的方法

摘要

本发明是一种利用RNA干扰技术防治烟粉虱的方法，属于农业生物技术领域。该方法，步骤如下：(1)根据烟粉虱的基因序列选取RNAi的靶序列IAP基因，并设计靶序列的PCR扩增引物；(2)提取烟粉虱的RNA并通过反转录获得cDNA，然后PCR扩增cDNA，纯化后制得目的基因；(3)将目的基因插入到表达载体，制得含有目的基因的表达载体；(4)将含有目的基因的表达载体转化作物，获得具有防治烟粉虱的转基因作物，种植该作物即可。本发明对于利用RNAi技术研究烟粉虱的基因功能、利用RNAi技术防治烟粉虱和转基因植物防治烟粉虱具有重要的指导价值和理论意义。

主权项

一种利用RNA干扰技术防治烟粉虱的方法，步骤如下：(1)根据烟粉虱的基因序列选取RNAi的靶序列IAP基因，并设计靶序列的PCR扩增引物，上游引物的5’端引入BglII酶切位点，下游引物的5’端引入Xho I酶切位点；(2)提取烟粉虱的RNA并通过反转录获得cDNA，然后用步骤(1)制得的PCR扩增引物对cDNA中含有的IAP基因的cDNA进行PCR扩增，纯化后制得目的基因；(3)将步骤(2)制得的目的基因插入到pMD18‑T载体中，用BglII和Xho I酶切获得酶切片段，将其反向连接至pUC‑RNAi载体，再用BamH I和Sal I酶切获得酶切片段，将其正向连接至pUC‑RNAi载体，用Pst I酶切pUC‑RNAi载体，回收酶切片段，将其插入用Pst I酶切的表达载体pCAMBIA2300‑35S中，制得含有目的基因的表达载体；(4)将步骤(3)制得的含有目的基因的表达载体转化作物，获得具有防治烟粉虱的转基因作物，种植该作物即可。