vetor , célula hospedeira, kit, composição dos suplementos de cultura celular, e, métodos para selecionar células que possam sobreviver em meio sem colesterol, para se obter células que tenham a capacidade de sobreviver em um meio desprovido de colesterol e produzir uma proteìna heteróloga, e para expressar uma proteìna heteróloga

摘要

VETOR, CéLULA HOSPEDEIRA, KIT, COMPOSIçãO DOS SUPLEMENTOS DE CULTURA CELULAR, E, MéTODOS PARA SELECIONAR CéLULAS QUE POSSAM SOBREVIVER EM MEIO SEM COLESTEROL, PARA SE OBTER CéLULAS QUE TENHAM A CAPACIDADE DE SOBREVIVER EM UM MEIO DESPROVIDO DE COLESTEROL E PRODUZIR UMA PROTEìNA HETERóLOGA, E PARA EXPRESSAR UMA PROTEìNA HETERóLOGA. A presente invenção diz respeito a novos vetores marcadores de seleção, e a métodos para usar estes vetores para gerar sistemas estáveis de expressão de genes nas células eucarióticas. Mais especificamente, a presente invenção fornece composições e métodos que utilizam qualquer enzima útil na via biossintética eucariótica de esterol/colesterol, tal como uma 3- cetosteróide redutase, como um marcador de seleção metabólica para selecionar células transfectadas. Em uma forma de realização, o método compreende transfectar células que sejam auxotróficas quanto ao colesterol com um vetor codificando a 3-cetosteróide redutase e pelo menos uma proteína heteróloga, e selecionar células que tenham a capacidade de sobreviver em meio carente de colesterol e/ou de produzir a proteína heteróloga nestas células em meios quimicamente definidos e/ou livres de soro.