检测瓠瓜白粉病抗性的分子标记方法及其试剂盒

摘要

本发明公开了检测瓠瓜白粉病抗性的分子标记方法及其试剂盒，属于蔬菜分子遗传育种技术领域。方法包括：(1)瓠瓜基因组DNA的提取；(2)PCR扩增；(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析；和(4)瓠瓜样品白粉病抗性的鉴定等步骤。只需通过检测瓠瓜样品材料的基因组内，是否存在有与抗白粉病基因紧密连锁的特异片段，即可确定该材料是否具对瓠瓜白粉病的抗性。该方法具简单易行、快速灵敏、结果准确、成本低廉等特点，检测过程只需4～5小时，而成本仅为传统表型鉴定的二十分之一左右。可在蔬菜育种、种子鉴定部门推广应用。

主权项

检测瓠瓜白粉病抗性的分子标记方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)瓠瓜基因组DNA的提取：将各待检测瓠瓜样品用CTAB法提取基因组DNA后，分别保存，备用；(2)基因组DNA的PCR扩增：将瓠瓜各样品基因组DNA 20ng，分别加入各PCR管中，并在各管中再依次加入鉴定瓠瓜白粉病抗性的上、下游引物各0.2μM，dNTP 0.25mM，MgCl2 2.0mM，1倍的PCR缓冲液及Taq DNA聚合酶1单位，并加无菌重蒸水至20μl后，在94℃预变性2min，94℃30seconds，48～50℃退火30seconds，72℃延伸60seconds，30个循环，72℃延伸10min下进行扩增，产物4℃保存；所述鉴定瓠瓜白粉病抗性的上游引物序列为5’‑CATGAAAGAAAATCGGCTTGG‑3’；下游引物序列为5’‑TAACTCCAGCACTCCCTTCCC‑3’；(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析：各样品分别取扩增产物10μl，并加入由0.25％溴酚兰和40％蔗糖配制而成的上样缓冲液2μl，混匀；将混合物在2％琼脂糖凝胶上进行电泳分离，至溴酚兰到达凝胶的2/3位置处停止电泳；凝胶经EB染色后用凝胶成像系统进行观察、照相；(4)瓠瓜样品白粉病抗性的鉴定：依据各样品在凝胶上有条带出现的，即确定该样品对白粉病具有抗性，若无条带出现的，确定该样品对白粉病无抗性。