基于核酸外切酶Ⅰ末端保护分析检测小分子与结合蛋白相互作用的光学生物传感技术

摘要

本发明公开了一种基于单链核酸外切酶I末端保护分析检测小分子与结合蛋白相互作用的光学生物传感技术，它包括(1)末端有机小分子修饰的含有血红素适体序列的寡核苷酸DNA单链与蛋白的相互作用及核酸外切酶I保护分析；(2)末端保护的含有血红素适体序列的寡核苷酸DNA单链的显色与化学发光检测。该方法灵敏度高、操作简便、特异性强，可与目前生物检测中普遍使用的酶标仪联合使用，也可目视检测，可望成为一种用于生物医学中信号转导与分子调控机理研究、食品与农产品安全检测、环境毒物检测、药物筛选的通用技术。

主权项

一种基于单链核酸外切酶I末端保护分析检测小分子与结合蛋白相互作用的光学生物传感方法，包括：(1)末端有机小分子修饰的含有血红素适体序列的寡核苷酸DNA单链与蛋白的相互作用及核酸外切酶I保护寡核苷酸DNA单链，然后对所保护的寡核苷酸DNA单链进行分析；对于小分子与其结合蛋白的相互作用，检测步骤是：取所述有机小分子修饰含有血红素适体序列的寡核苷酸DNA单链的储备液置于微量管中；再于微量管中加入包含小分子的结合蛋白的样品溶液；然后加入核酸外切酶I反应，得末端保护反应的产物；对于待测小分子的检测，采用竞争反应检测步骤：取所述有机小分子修饰含有血红素适体序列的寡核苷酸DNA单链的储备液置于微量管中；再加入包含待测小分子的样品溶液，混合均匀后加入小分子的结合蛋白或单克隆抗体溶液；再加入核酸外切酶I，得末端保护反应的产物；(2)基于小分子的结合蛋白对标记有小分子的血红素适体序列的寡核苷酸DNA单链的末端保护，用显色与化学发光检测法对所保护的含有血红素适体序列的寡核苷酸DNA单链进行检测；所述检测采用以下方法之一：a.吸收光度法检测：在所述末端保护反应的产物中加入血红素及2，2’‑联氮双(3‑乙基苯并噻唑啉‑6‑磺酸)二铵盐，再加入双氧水，用紫外分光光度计测其在300‑500nm范围内任意波长处的吸光度值；b.化学发光法检测：在所述末端保护反应的产物中加入血红素及鲁米诺，再加入双氧水，于300‑500nm范围内任意波长处记录其化学发光强度，并确定最大发光峰值。