一种土壤和沉积物总DNA提取方法及提取试剂盒

摘要

本发明涉及一种土壤和沉积物总DNA提取方法及提取试剂盒，即首先应用腐殖酸溶解液，最大程度地溶解和去除土壤和沉积物中的腐殖酸，再将剩余腐殖酸进行络合沉淀，然后无选择地裂解释放细菌体内的基因组DNA，离心后去除溶液中的络合腐殖酸和蛋白质，而含DNA的上清溶液则通过酸碱调节试剂和高盐溶液调节后，以硅胶吸附膜特异吸附而使基因组DNA得以纯化回收。本发明的方法可以在较短时间内同时提取多个样品，正常操作时间小于70min，可以获得高纯度、适合下游分析的大量DNA样品。依据本发明方法建立的试剂盒获得的DNA样品纯度高，无降解，可直接用于后续分子生物学分析，同时避免了传统DNA提取方法需要酚/氯仿等毒性试剂纯化DNA的步骤，具有广阔的应用前景。

主权项

一种土壤和沉积物总DNA提取方法，依次包括如下步骤：1)用腐殖酸溶解液去除待提取样品大部分腐殖酸，得到样品沉淀；2)向上述步骤1)的待提取样品沉淀中加入腐殖酸络合剂，使剩余的腐殖酸充分络合，离心使腐殖酸络合物和细菌样品沉淀；3)向上述步骤2)沉淀中加入细胞裂解液，漩涡振荡释放出细菌总DNA，离心得到上清溶液；4)向上述步骤3)上清溶液中加入酸碱调节剂，离心获取上清液；5)向上述步骤4)上清液中加入高盐溶剂，过硅胶吸附膜吸附DNA；6)将上述步骤5)吸附的DNA进行清洗，用洗脱液洗脱得到样品的总DNA。