三重荧光定量RT-PCR检测试剂盒及用途

摘要

本发明提供一种三重实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒，包含定量RT-PCR反应液、标准品、对照品，盒体设有容器孔，分别放置定量RT-PCR反应液管、札如病毒标准品管、星状病毒标准品管、腺病毒标准品管、阳性对照品管、阴性对照品管，其中定量RT-PCR反应液单管分装，矩阵排列，标准品为札如病毒、星状病毒和腺病毒基因标准品，对照品为阳性和阴性对照品。本发明试剂盒运用实时荧光定量RT-PCR技术，采用三种病毒特异引物和特异荧光探针，设计合理，通过一个PCR反应，可以从标本中检测出札如病毒、星状病毒和腺病毒，检测方法更简便、快速和准确。

主权项

一种三重实时荧光定量RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含：定量RT‑PCR反应液、札如病毒标准品、星状病毒标准品、腺病毒标准品、阳性对照品、阴性对照品，盒体（7）设有容器孔，分别放置荧光定量RT‑PCR反应液管（1）、札如病毒标准品管（2）、星状病毒标准品管（3）、腺病毒标准品（4）、阳性对照品管（5）、阴性对照品管（6），其中荧光定量RT‑PCR反应液管包含RT‑PCR反应缓冲液管、上下游引物同管装的三种病毒通用引物管、相应的三种荧光探针管和含RNA酶抑制剂、莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶和耐热DNA聚合酶的酶混合物管，RT‑PCR反应缓冲液管内含氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，三重荧光定量RT‑PCR检测用上游引物和下游引物以及相应的特异性荧光探针序列如下：上游引物札如病毒‑FP: 5’‑ CAACTATGACCAGGCTCTCGC‑3’下游引物札如病毒‑RP: 5’‑ GCCCTCCATYTCRAACACTA‑3’特异性探针札如病毒‑P: 5’‑ FAM ‑ CTTGGTTYATAGGYGGTACA ‑BHQ1‑3’上游引物星状病毒‑FP: 5’‑AATACGGACGCAACAAACGTC‑3’   下游引物星状病毒‑RP: 5’‑GTCCTGTGACACCCTGTTTCC‑3’     特异性探针星状病毒‑P : 5’ ‑VIC ‑AGTCTAATCAACGTGTCCGTAACATTGTC‑BHQ1‑3’上游引物腺病毒‑FP: 5’‑CCCTGCTTTATCTTCTTTTCGAAG‑3’   下游引物腺病毒‑RP: 5’‑GAGAACGGTGTGCGCAGG‑3’     特异性探针腺病毒‑P : 5’ ‑ROX ‑CACCAGCCACACCGCGGC‑BHQ1‑3’所述的札如病毒、星状病毒和腺病毒基因标准品序列如下：札如病毒标准品序列为：CAACTATGAC CAGGCTCTCG CCACCTACGA ATCTTGGTTC ATAGGTGGTA CAGGCCTGGT ACAAGGTAGC CCCAGTGAAG AGACCACCAA ATTAGTGTTT GAAATGGAG  GGC    星状病毒标准品序列为：aatacggacg caacaaacgt cagtctaatc aacgtgtccg taacattgtc aataagcaac  tcaggaaaca  gggtgtcaca  ggac腺病毒标准品序列为：CCCTGCTTTA TCTTCTTTTC GAAGTCTTCG ACGTGGTCAG AGTGCACCAG CCACACCGCG  GCGTCATCGA  GGCCGTCTAC  CTGCGCACAC  CGTTCTC。