利用慢病毒载体介导RNAi的方法

摘要

本发明是一种利用慢病毒载体介导RNAi的方法，具体是：先对相关病毒的核酸序列进行同源性分析，找出保守区域，设计出针对相关病毒保守区域的siRNA；将siRNA克隆到表达质粒pLVTH后，再与pCMV-dR8.91、pMD2.G共同转染293T细胞中，收集转染后细胞上清，经超速离心、纯化、浓缩后形成了表达siRNA的高滴度的慢病毒载体，然后将其与LV-tTR-KRAB共转导入靶细胞，并且利用四环素类似物DOX来严格控制siRNA药物作用的时间及剂量。本发明因其高效的转导率及严格的控制体系可以真实的评价siRNA在体内的抗病毒作用，同时可以追踪药物干扰作用的全过程，从而为临床提供了使用前景。

主权项

一种利用慢病毒载体介导RNAi的方法，其特征是一种基于强力霉素控制的慢病毒载体介导RNAi的方法，具体是：首先，运用相关的生物学软件对相关病毒的核酸序列进行同源性分析，找出保守区域，设计出针对相关病毒保守区域的siRNA；再将合成的siRNA克隆到表达质粒pLVTH中，然后将该表达质粒与pCMV‑dR8.91、pMD2.G共同转染293T细胞中，收集转染后细胞上清，经超速离心、纯化、浓缩后形成了表达siRNA的高滴度的慢病毒载体，最后将表达siRNA的慢病毒载体与控制四环素开关的慢病毒载体LV‑tTR‑KRAB共转导入靶细胞，并且利用四环素类似物DOX来严格控制siRNA药物作用的时间及剂量。