杂交瘤细胞及其制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种制备分泌抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞的方法，以及根据该方法获得的杂交瘤细胞株、抗体及其应用。所述方法包括小鼠免疫、细胞融合与接种、鼠疫F1抗体检测、杂交瘤细胞克隆。本发明的分泌高效价抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株能够持续性地产生鼠疫F1单克隆抗体，为建立鼠疫快速诊断方法提供了抗体源。

主权项

一种制备分泌抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)小鼠免疫：每只BALB/c小鼠注射100μg鼠疫F1抗原；(2)细胞融合与接种：将免疫后的小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，在融合的过程中采用Sigma公司生产的PEG，所述PEG溶液的浓度为50％；将融合细胞用HAT及HT培养液接种，所述HAT及HT培养液采用Sigma公司的HAT冻干粉和HT冻干粉制备；采用Hyclone公司生产的加强型小牛血清为融合细胞提供营养来源；(3)鼠疫F1抗体检测：采用酶联免疫吸附测定检测所述融合细胞培养上清中的鼠疫F1抗体，其中鼠疫F1抗原的包被浓度为8μg/ml；(4)杂交瘤细胞克隆化：将两次所述鼠疫F1抗体检测均为阳性的杂交瘤细胞株进行至少三次克隆化，直到单个细胞克隆的鼠疫F1抗体检测均为阳性。