发明名称 检测蛋白质摺叠之方法
摘要
申请公布号 TWI349710 申请公布日期 2011.10.01
申请号 TW093102976 申请日期 2004.02.09
申请人 中央研究院 发明人 赵裕展;何愈
分类号 C12N7/01 主分类号 C12N7/01
代理机构 代理人 陈长文 台北市松山区敦化北路201号7楼
主权项 一种检测蛋白质摺叠的方法,包括:分离非胞裂性杆状病毒感染细胞所表现含有萤光捐赠者发色团功能部位和萤光接受者发色团功能部位的蛋白质,安排这两个萤光发色团功能部位,使它们在蛋白质摺叠时非常接近,容许在其间发生萤光共振能量转移;并在以激发光照射捐赠者萤光发色团功能部位时,监视接受者萤光团功能部位的萤光发射改变,该改变为蛋白质摺叠的函数,其限制条件为该蛋白质摺叠不受钙离子影响。根据申请专利范围第1项之方法,其中该捐赠者萤光发色团功能部位是ECFP萤光蛋白,且该接受者萤光发色团功能部位是EYFP萤光蛋白。一种在细胞中检测蛋白质摺叠的方法,包括:在经非胞裂性杆状病毒感染细胞中表现含有萤光捐赠者和萤光接受者的蛋白质,安排这两个萤光发色团,使它们在蛋白质摺叠时非常接近,容许在其间转移共振能;并在以激发光照射捐赠者萤光发色团时,监视接受者萤光发色团的萤光发射改变,该改变为蛋白质摺叠的函数,其限制条件为该蛋白质摺叠不受钙离子影响。根据申请专利范围第3项之方法,其中该捐赠者萤光发色团和接受者萤光发色团是两个不同的萤光蛋白质功能部位。根据申请专利范围第4项之方法,其中该捐赠者萤光蛋白为ECFP,且该接受者萤光蛋白为EYFP。根据申请专利范围第4项之方法,其中该细胞为细菌、酵母菌、昆虫、植物或哺乳动物细胞。根据申请专利范围第6项之方法,其中该细胞为昆虫细胞。根据申请专利范围第3项之方法,其中该细胞为细菌、酵母菌、昆虫、植物或哺乳动物细胞。根据申请专利范围第8项之方法,其中该细胞为昆虫细胞。一种筛选与蛋白质之错误摺叠有关的化合物的方法,该方法包括:在第一个培养基中培养化合物和多个具有与萤光捐赠者和萤光接受者连接之蛋白质的细胞,安排这两个萤光团,使它们在蛋白质摺叠时非常接近,容许在其间萤光共振能量转移;并在以激发光照射捐赠者萤光发色团时,藉着监视从捐赠者或接受者萤光发色团发射萤光的细胞,判定该化合物是否影响蛋白质之错误摺叠。根据申请专利范围第10项之方法,其中藉着确认发射接受者萤光发色团之萤光的细胞的百分比进行该判定步骤,其中若从接受者萤光团发射萤光之细胞的百分比相较于以相同方式(除了第二个培养基中不含该化合物)对在第二个培养基中之细胞判定的更高时,则判定该化合物可有效治疗该疾病。根据申请专利范围第11项之方法,其中该捐赠者萤光发色团和接受者萤光发色团是两个不同的萤光蛋白质功能部位。根据申请专利范围第12项之方法,其中该捐赠者萤光发色团为ECFP,且该接受者萤光发色团为EYFP。根据申请专利范围第10项之方法,其中藉着确认发射捐赠者萤光发色团之萤光的细胞的百分比进行该判定步骤,其中若从捐赠者萤光发色团发射萤光之细胞的百分比相较于以相同方式(除了第二个培养基中不含该化合物)对在第二个培养基中之细胞判定的更低时,则判定该化合物可有效治疗该疾病。根据申请专利范围第14项之方法,其中该捐赠者萤光发色团和接受者萤光发色团是两个不同的萤光蛋白质功能部位。根据申请专利范围第15项之方法,其中该捐赠者萤光蛋白为ECFP,且该接受者萤光蛋白为EYFP。根据申请专利范围第10项之方法,其中藉着细胞的共振能转移效率进行该判定步骤,其中若共振能转移效率相较于以相同方式(除了第二个培养基中不含该化合物)对在第二个培养基中之细胞判定的更高时,则判定该化合物可有效治疗该疾病。根据申请专利范围第17项之方法,其中该萤光捐赠者发色团和萤光接受者发色团是两个不同的萤光蛋白质功能部位。根据申请专利范围第18项之方法,其中该捐赠者萤光蛋白为ECFP,且该接受者萤光蛋白为EYFP。根据申请专利范围第10项之方法,其中该萤光捐赠者发色团和接受者萤光发色团是两个不同的萤光蛋白质功能部位。根据申请专利范围第20项之方法,其中该捐赠者萤光发色团为ECFP萤光蛋白,且该接受者萤光发色团为EYFP萤光蛋白。根据申请专利范围第10项之方法,其中该细胞为细菌、酵母菌、昆虫、植物或哺乳动物细胞。根据申请专利范围第22项之方法,其中该细胞为昆虫细胞。
地址 台北市南港区研究院路2段128号