用于提高杆状病毒对哺乳动物细胞转导效率的方法

摘要

本发明涉及一种用于提高杆状病毒对哺乳动物细胞转导效率的方法，该方法包括准备工作、病毒的构建、病毒的扩增、滴度测定和在低pH诱导下的转导；所述在低pH诱导下的转导包括细胞和病毒的预处理，病毒和细胞的结合，以及低pH诱导膜融合的步骤。该方法与丁酸钠联用，其通过细胞和病毒的预处理、病毒和细胞的结合，以及低pH诱导膜融合的步骤，使AcMNPV作为载体进行外源蛋白的表达。本发明可以显著提高AcMNPV对哺乳动物细胞的转导效率及外源蛋白的表达量，在外源蛋白的表达和基因治疗方面具有潜在的应用价值。

主权项

一种用于提高杆状病毒对哺乳动物细胞转导效率的方法，包括准备工作、病毒的构建、病毒的扩增和滴度测定，其特征是还包括在低pH诱导下的转导，其采用包括以下步骤方法实现单纯低pH诱导AcMNPV对哺乳动物细胞的转导：细胞和病毒的预处理：将细胞培养基换成含终浓度氯化铵的无血清DMEM培养基，37℃孵育25～35 min，然后将细胞放置到4℃继续孵育12～18 min；将病毒用中性pH的PBS稀释后放置在冰上预冷至少15 min；所述终浓度氯化铵为10mM的人肝癌HepG2细胞系或25mM的人宫颈癌HeLa细胞系；病毒和细胞的结合：将预冷完成的病毒和细胞在4℃孵育50～60 min，期间间隔12～18分钟轻微晃动培养皿；低pH诱导膜融合：孵育结束后，弃掉病毒上清，用预冷的普通中性pH的PBS洗涤细胞2次，然后加入室温的酸性PBS缓冲液，在室温诱导4～6分钟；诱导之后弃去酸性PBS缓冲液，用中性pH的PBS洗涤细胞，加入无血清DMEM培养基，在37℃继续培养1.8～2.2小时，最后将培养基换成不含氯化铵的10%胎牛血清的DMEM，并且在37℃培养。