对虾黄头病毒现场快速高灵敏检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及对虾黄头病毒现场快速高灵敏检测试剂盒及检测方法。试剂盒包括：采样管、内装蒸馏水的漂洗管、内装TE缓冲液的核酸变性管、内装扩增反应液和核酸染料的扩增检测管、阴性对照管、阳性对照管、FTA膜片及其快速干燥液等。本发明的检测方法具有比RT-PCR检测方法更高的特异性、灵敏性和便捷性，且成本低，使用方便，检测更准确、快速、灵敏度极高，且对人和环境都非常安全，可以替代已有的相关检测方法如电镜观察法和RT-PCR检测法等。本发明不仅可在室内的实验室使用，也可在野外的生产现场使用，对加强对虾黄头病毒的流行病学监测以及对虾养殖水体监测和疾病防控意义重大，具有很高的推广应用价值。

主权项

一种对虾黄头病毒现场快速高灵敏检测试剂盒，其特征是该检测试剂盒包括：(1)采样管，用来盛放、研磨待检样品；(2)漂洗管，内装蒸馏水；(3)核酸变性管，内装TE缓冲液；(4)扩增检测管，内装扩增反应液和核酸染料，扩增反应液由以下组份组成：扩增引物的上游引物1和下游引物1各1～2μM，扩增引物的上游引物2和下游引物2各0.1～0.4μM，dATP、dTTP、dGTP和dCTP各0.8～2.0mM，MgCl2 4～10mM，甜菜碱0.6～1.2M，Tris‑HCl 10～40mM，KCl 10～20mM，MgSO41～4mM，(NH4)2SO46～12mM，Triton X‑1000.05％～1.0％，反转录酶1～20U，具有链置换活性的DNA聚合酶2～20U；扩增引物的核酸序列如下：上游引物1：5′‑AGTAGCAAATTGTAGCAAGAAGCCTTTTCCTTCCTCTTATCTACTTTACTCTC下游引物1：5′‑CCTCACATTCTCTGGACGCATTTTTATTGTACGGATTGTGTTGTT上游引物2：5′‑TGCGGGGCTTATTTCTGA下游引物2：5′‑AGCGAACTTAGATGACAAGA；(5)阴性对照管，内装无对虾黄头病毒核酸的FTA膜片；(6)阳性对照管，内装吸附了对虾黄头病毒核酸的FTA膜片；(7)快速干燥液；(8)FTA膜片、研磨棒、牙签和吸管分别封装于无菌袋中。