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一种提取荔枝总RNA的方法，其特征是包括如下步骤：1)、将采集的用液氮进行速冻处理的荔枝嫩叶片样品，加入PVP及液氮进行研磨成细粉后，转入离心管中，加入已于‑20℃进行预冷的70％丙酮，混匀，抽提，4℃，8000～13000g，离心10～20min，弃上清液；重复抽提2～3次，保留抽提过的植物材料；2)、在步骤(1)抽提后的植物材料中加入于60℃预热的RNA提取液5.5ml，并于60℃水浴10‑30min；所述RNA提取液是由如下组分组成：Tris Base 150mmol/L、H3BO3 575mmol/L、EDTA 50mmol/L、NaCl 0.5mol/L、SDS 4％；3)、在步骤(2)所得水浴后的植物材料中缓慢加入200μl β‑巯基乙醇、1.375ml无水乙醇和605μl 5mol/L的KAc，混匀，再加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀，4℃，8000～13000g，离心30min；所述氯仿/异戊醇混合液是将氯仿、异戊醇按体积比为24∶1的比例混合而成；4)、吸取离心后的上清液，再加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀，4℃，8000～13000g，离心30min；取上清液重复上述步骤2～3次；5)、将步骤(4)得到的上清液置入离心管中，加入1/3体积的9mol/L的LiCl溶液，‑20℃放置3～5小时；4℃，10000～14000g，离心15～30min，收集沉淀；6)、用1/4体积的3mol/L的LiCl洗涤沉淀，4℃，10000～14000g，离心15～30min，弃上清；7)、将步骤(6)洗涤后的沉淀进行干燥，然后加入DEPC灭菌水溶解沉淀，再加入等体积的氯仿/异戊醇混合液进行抽提一次，4℃，10000～14000g，离心15～30min；8)、取上清液，加入4倍于上清液体积的无水乙醇和1/10体积的5mol/L的KAc(pH＝4.8)，‑20℃放置1h；4℃，14000g，离心30min；9)、沉淀用75％乙醇洗涤两次，在室温下晾干后用DEPC灭菌，然后用溶剂将沉淀溶解，在‑80℃中保存备用。 |
