水解酶、编码它们的核酸及其制备和应用方法

摘要

提供的是水解酶，包括脂肪酶、饱和酶、棕榈酸酶和/或硬脂酸酶，编码它们的多核苷酸以及制备和使用这些多核苷酸和多肽的方法。另外提供的是多肽，例如酶，其具有水解酶活性，例如，脂肪酶、饱和酶、棕榈酸酶和/或硬脂酸酶活性，以及制备低饱和或低反式脂肪油的方法，诸如低饱和或低反式脂肪动物或植物油，例如大豆油或油菜油。

主权项

分离的、合成的或重组的核酸，其包括(a)，编码至少一种多肽的核酸(多核苷酸)，其中所述核酸包括与下列具有至少约50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或更大、或完全的(100％)序列同一性的序列：(i)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：23，或(ii)SEQ ID NO：1的核酸，其具有编码一个、二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个、二十一个、二十二个、二十三个、二十四个或更多个或所有的如表3、表4、表9、表10、表11、表16或表23中所示的氨基酸变化(或其等同变化)的一个或多个核苷酸变化(或其等同变化)，其中所述(i)或(ii)的核酸编码至少一种具有水解酶活性的多肽，或者编码能产生水解酶特异性抗体的多肽或肽(充当表位或免疫原的多肽或肽)，(b)，(a)的核酸(多核苷酸)，其中所述序列同一性如下测定：(A)通过用序列比较算法进行分析或通过视觉检查，或(B)在至少约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550或更多个残基的区域内，或在cDNA、转录物(mRNA)或基因的全长区域内，(c)，(a)或(b)的核酸(多肽)，其中所述序列比较算法是BLAST第2.2.2版算法，其中过滤设置被设置为blastall‑p blastp‑d“nr pataa”‑F F，并且所有其它选项被设置为默认值，(d)，核酸(多核苷酸)，其编码至少一种具有水解酶活性的多肽或多肽，其中所述核酸包括在严格条件下与(a)、(b)或(c)的核酸的互补序列杂交的序列，其中所述严格条件包括在约65℃的温度下在0.2×SSC中洗涤约15分钟的洗涤步骤，(e)，核酸(多核苷酸)，其编码至少一种具有水解酶活性例如脂肪酶、饱和酶、棕榈酸酶和/或硬脂酸酶活性的多肽，其中所述多肽包括SEQ ID NO：2的序列或其酶促活性片段，具有至少一个、二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个、二十一个、二十二个、二十三个、二十四个或更多个或所有的如表3、表4、表9、表10、表11、表16或表23中所示的氨基酸变化(或其等同变化)，(f)，核酸(多核苷酸)，其编码至少一种具有水解酶活性的多肽，其中所述多肽包括SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20的序列或其酶促活性片段，(g)，(A)，(a)至(f)任一项的并且编码多肽的核酸(多核苷酸)，所述多肽具有至少一个保守性氨基酸置换并且保留其水解酶活性，或(B)，(g)(A)的核酸，其中所述所述至少一个保守性氨基酸置换包括用另一类似特征的氨基酸置换氨基酸；或者，保守性置换包括：用另一脂肪族氨基酸替换脂肪族氨基酸；用苏氨酸替换丝氨酸或反之亦然；用另一酸性残基替换酸性残基；用另一含有酰胺基团的残基替换含有酰胺基团的残基；用另一碱性残基交换碱性残基；或用另一芳香族残基替换芳香族残基，(h)，(a)至(g)任一项的、编码多肽的核酸(多核苷酸)，所述多肽具有水解酶活性但缺少信号序列，(i)，(a)至(h)任一项的、编码多肽的核酸(多核苷酸)，所述多肽具有水解酶活性，进一步包括异源序列，(j)，(i)的核酸(多核苷酸)，其中所述所述异源序列包括编码下列的序列或由编码下列的序列组成：(A)异源信号序列；(B)，(A)的序列，其中所述异源信号序列得自异源酶；或者(C)标记、表位、靶向肽、可切割序列、可检测部分或酶，或(k)，核酸序列(多核苷酸)，其与(a)至(j)任一项的序列充分(完全)互补。