细菌表面抗原Ag43表达系统的构建方法

摘要

本发明提供一种可以和细菌表面抗原Ag43嵌合表达的原核表达系统的构建方法。来源于大肠杆菌JM109的Ag43基因敲除细菌Tan109和重组质粒pET-Ag43作为一个有效的原核基因表达系统，可以将外源基因嵌合于Ag43的中进行共表达，并能将外源基因和Ag43嵌合表达(展示)于细菌表面，通过加热就可获得和Ag43嵌合的重组蛋白，比传统的提取重组蛋白方法容易，活性好。

主权项

一种细菌表面抗原Ag43表达系统的构建方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、利用基因敲除技术将大肠杆菌JM109的Ag43基因敲除，获得了Ag43基因敲除细菌Tan109；(2)、利用基因工程技术将Ag43基因第598bp以后的基因插入原核表达质粒pET‑28a多克隆位点Hind III和Xho I之间，获得重组质粒pET‑Ag43，保留pET‑28a多克隆位点Xho I之前所有的酶切位点；此后，将可以发出绿色荧光的FGP基因插入重组质粒pET‑Ag43多克隆位点Nhe I和Hind III之间，获得了重组质粒pET‑Ag43‑FGP；(3)、重组质粒pET‑Ag43‑FGP可以在细菌Tan109中有效表达，并将重组嵌合蛋白Ag43‑FGP表达于细菌表面；(4)、在细菌表面表达的重组嵌合蛋白Ag43‑FGP可以通过加热法从细菌表面分离获取；(5)、所获得的Ag43基因敲除细菌Tan109和构建的重组质粒pET‑Ag43二者构成了一个基因工程原核表达系统；由于重组质粒pET‑Ag43具有多个克隆位点，可以任意将外源基因取代本发明的FGP位置克隆进入该重组质粒pET‑Ag43，并能在细菌Tan109中有效表达，通过加热就可获得相应的Ag43嵌合重组蛋白。