一种从土壤中提取总DNA的方法

摘要

本发明公开了一种从土壤中提取总DNA的方法，将提取液加入到土壤试样混匀后反复冻融数次，依次加入蛋白酶K、SDS，离心取上清，加入PEG，离心取沉淀，加入TE溶解后氯仿/异戊醇抽提，离心取上清，再用NaAc及冷异丙醇室温沉淀后离心，沉淀用乙醇洗涤，离心取沉淀，即得到总DNA。本发明的提取方法，无需回收纯化DNA步骤，简化提取步骤，能有效提取总基因组DNA，真实反映土壤微生态结构。

主权项

一种从土壤中提取总DNA的方法，其特征在于，包括：（a）、取土壤试样，加1.5ml提取液，混匀，其中，所述土壤试样与提取液的质量体积比为1:2.5~3.5，所述提取液含有：50~200nM Tris，50~150nM EDTA，100~200nM NaCl，5~8wt%TEEPOL，pH为8.5~9.5；（b）、置于‑70~‑85℃冷冻20~30min后取出于60~70℃水浴融化，如此反复冻融数次；（c）、加入8~12mg/ml的蛋白酶K80~120ml震荡25~35min，加入浓度为18~22%的SDS 180~230ml，置于60~70℃水浴1.5~2.5hr，离心收集上清；（d）、所述上清加0.4~0.6倍体积的浓度为40~60w/v%的PEG混匀，静置沉淀；（e）、离心取沉淀，加入0.5~1ml TE溶解，用等体积的氯仿/异戊醇抽提，离心，取上清；（f）、用0.1~0.2倍体积的2~4mol/l的NaAc，以及0.5~0.8倍体积的冷异丙醇室温沉淀后离心；（g）、沉淀用60~80%(体积)乙醇洗涤，离心取沉淀，即得到总DNA。