一种ZP120的固相合成方法

摘要

本发明提供了一种ZP120：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2的固相合成方法，所述方法是以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接氨基保护基，再经脱保护基、酸化、脱切侧链保护基和树脂，得到ZP120的盐，进一步可得到ZP120。本发明有益效果主要体现在(1)采用Fmoc Rink Amide-MBHA树脂作为固相合成载体，成本低；(2)以N，N-二异丙基碳二亚胺作为肽合成缩合剂，产品过程消旋化低，产品质量好、收率高；(3)采用三氟乙酸切割ZP120肽树脂，切割完毕后直接得到肽酰胺的形式，后续处理简单；(4)工艺简单，程序化，利于工业化生产。

主权项

一种ZP120：Ac‑Arg‑Tyr‑Tyr‑Arg‑Trp‑Lys‑Lys‑Lys‑Lys‑Lys‑Lys‑Lys‑NH2的固相合成方法，其特征在于所述方法包括如下顺序步骤：(1)以Fmoc‑Rink Amide‑MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接以下保护基：Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Trp(Boc)‑OH，Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH，Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH，Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH，Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH，得到Fmoc‑Arg(Pbf)‑Tyr(tBu)‑Tyr(tBu)‑Arg(Pbf)‑Trp(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑NH‑Rink Amide MBHA树脂；所述程序反应步骤如下：①洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；②脱保护基：用20％的哌啶/DMF溶液室温下处理2～3次，每次20min，脱去Fmoc‑保护基；③洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；④连接保护基：加入1～5当量的Fmoc‑保护氨基酸，1～5当量的HOBt，所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N‑二甲基甲酰胺的混合溶液溶解，然后加入1～5当量的N，N‑二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温反应2～5小时；⑤洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；(2)用20％的哌啶/DMF溶液室温处理，脱Fmoc‑保护后得到H2N‑Arg(Pbf)‑Tyr(tBu)‑Tyr(tBu)‑Arg(Pbf)‑Trp(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑NH‑Rink Amide MBHA树脂；(3)加入乙酸酐/DMF溶液酸化，乙酸酐加入量为50当量，室温反应2～5小时，得到Ac‑Arg(Pbf)‑Tyr(tBu)‑Tyr(tBu)‑Arg(Pbf)‑Trp(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑NH‑Rink Amide MBHA树脂；(4)用试剂K脱切侧链保护基和树脂，得到ZP120的TFA盐粗品；所述试剂K体积配比如下：TFA∶thioanisole∶H2O∶phenol∶1，2‑ethanethiol＝82.5∶5∶5∶5∶2.5；(5)ZP120的TFA盐粗品用5％醋酸溶液溶解，过滤，滤液经C18键合硅胶装填的反相高效液相色谱柱纯化，水/乙腈梯度洗脱后冷冻干燥，得到ZP120的TFA盐；(6)将ZP120的TFA盐用强碱型阴离子交换树脂脱去三氟醋酸根离子，冷冻干燥得到ZP120，方法如下：将ZP120的TFA盐溶于水中，上样，用水洗脱，收集洗脱液，合并洗脱液浓缩，冷冻干燥得ZP120。