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一种早熟白色金针菇菌株的创制方法，其特征在于：所述的早熟白色金针菇菌株的创制方法包括以下步骤：（1）单核体分离与鉴定，操作方法如下：a、孢子收集：取出黄色金针菇菌株“金丝”的成熟子实体菌盖，将其放置在无菌纸上，放置12～24小时，直至无菌纸上出现孢子印为止；b、孢子萌发培养：取下无菌纸上的孢子印放入无菌水中，制作成孢子液，再用无菌水稀释孢子液至50～100个/毫升，取1毫升孢子液涂布培养基平板上,培养基为酵母粉葡萄糖琼脂培养基，在20～28℃下培养4～6天，直至孢子萌发成白色菌落，取单个白色菌落转接在酵母粉葡萄糖琼脂培养基上，在20～28℃下培养；c、单核体鉴定：取菌丝体放在玻璃片上，用水展开菌丝体，盖上盖玻璃片，在400倍显微镜下观察，将无锁状联合的菌种，确定为单核体菌株；（2）杂交配对，操作方法如下：a、杂交配对：将黄色金针菇菌株的单核体菌株30～50个分别接种在酵母粉葡萄糖琼脂培养基平板上，同时接种白色金针菇菌株F092的双核体菌株，在20～28℃下培养到菌丝体生长相互接触为止；b、杂交种鉴定：在黄色金针菇菌株单核体一侧取直径为0.3～0.5cm大的菌种块，接种在试管装斜面酵母粉葡萄糖琼脂培养基上，在20～28℃下培养，待菌丝生长1～3cm长时，取菌丝体放在玻璃片上用水展开，盖上盖玻片，在显微镜400倍下观察，将有锁状联合标记的菌种初步确定为杂交种；再进行拮抗鉴定，拮抗鉴定方法为：将初步确定的杂交种接种在酵母粉葡萄糖琼脂培养基平板上，中部接种杂交菌种，两侧接种亲本菌株，相距2～3cm，在20～28℃下培养至菌丝生长接触后，再在自然光照培养7～10天，凡是与两亲本菌株之间出现沟状、或隆起、或隔离现象的确定为杂交种；（3）杂交种筛选方法，操作方法如下：a、杂交种栽培筛选方法：首先制作栽培培养基，其配方以重量百分比为：棉籽壳75～85％，麸皮15～25％；将棉籽壳和麸皮按比例混合后，加入水搅拌均匀，加水量为棉籽壳麸皮混合物与水的比例为1：1.1～1：1.2，再将培养基装入1100毫升塑料瓶内，用塑料薄膜或者瓶盖封口，在高压灭菌锅内0.14兆帕下灭菌处理3～4小时，冷却至30℃以下时，将杂交种接种在瓶内，在20～25℃下培养，待菌丝生长满瓶后，将菌种瓶移到菇房内，温度控制在10～18℃，待子实体形成后，揭取塑料薄膜进行出菇，当子实体生长高度达到3～4cm时，在子实体上套上塑料筒培育子实体，当子实体高度达到18～20cm时采收；b、将杂交种农艺性状与亲本菌株进行比较：筛选具有双亲菌株共有性状的杂交菌株，即杂交种子实体菌盖为黄白色，颜色介于黄色与白色之间，菌盖形状为半球形，与白色金针菇菌株相似，菌柄白色、粗壮，基部无绒毛，不粘连；（4）自交种构建方法a、杂交菌株单核体分离与鉴定取杂交菌株的孢子，进行单孢分离培养获得单核体菌株，单核体分离与鉴定方法同步骤（1），获得50～100个单核体菌株；b、构建自交菌株在酵母粉葡萄糖琼脂培养基平板上配对，采取两两配对方法进行配对，在同一平板培养上接种2个单核体菌株，相距1～2cm，在20～28℃下培养，待菌丝生长接触后，取接触部位的菌丝体转接于斜面酵母粉葡萄糖琼脂培养基上，当菌丝生长距离达到1～3cm时，取菌丝进行鉴定，在显微镜下观察有无锁状联合，将有锁状联合的菌种，确定为双核体菌株，得到自交代菌株；c、出菇筛选方法：出菇筛选方法步骤（3），以黄色金针菇菌株和白色金针菇菌株为对照，定向筛选生长周期与黄色金针菇一致，子实体为白色，菌柄基部无绒毛，不粘连的菌种； d、自交菌株性状固定将筛选出的自交菌株，取菌盖组织进行分离获得遗传稳定的菌株F212‑1。 |
