一种检测水源水遗传毒性物质的简易方法

摘要

本发明公开了一种检测水源水遗传毒性物质的简易方法，包括以下步骤：将菌株TA1535接种到液体LB或者营养肉汤培养基里，振荡培养，用无菌水调整菌悬液浓度至OD595为0.2-0.3，得菌悬液；取至少四个浓度梯度的水样样品浓缩物，分别加入到所述的菌悬液中，振荡培养，以DMSO为溶剂对照，以4-NQO为阳性对照；振荡培养后加入B-Buffer混匀，再加氯仿振荡混匀；加入ONPG溶液，温育显色30-50min；加入Na2CO3溶液终止显色，测定显色后溶液的OD420和OD550；算样品和溶剂对照的酶活性，并计算诱导率IR。本发明检测水源水中遗传毒性物质的简易方法，可以在保持试验操作常规化，测试结果精确、灵敏的前提下，省略很多步骤，节省大量时间。

主权项

1.一种检测水源水遗传毒性物质的简易方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将菌株TA1535接种到液体LB或者营养肉汤培养基里，振荡培养过夜得到菌悬液，用无菌水调整菌悬液浓度至OD₅₉₅为0.2-0.3；2)取至少四个浓度梯度的水样样品浓缩物各100μl，分别加入到550-650μl步骤1)所述的菌悬液中，35±2℃振荡培养2-3h，以二甲基亚砜为溶剂对照，以4-硝基喹啉-1-氧化物为阳性对照，四个浓度梯度的水样样品浓缩物，分别相当于水样样品的2L、1L、0.5L和0.25L；3)振荡培养后加入2.5-3.0ml B-Buffer混匀，再加入5-10μl氯仿振荡混匀；加入500-800μl ONPG溶液，35±2℃温育显色30-50min；B-buffer的主要成分是：磷酸氢二钠20.18g/L，磷酸二氢钠5.5g/L，氯化钾0.75g/L，硫酸镁0.25g/L，使用前每100ml B-buffer中加有2-疏基乙醇270ul；所述ONPG溶液是将45mg邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷溶解在10ml pH为7.0±0.2的磷酸盐缓冲液；4)加入300-500μl Na₂CO₃溶液终止显色，测定显色后溶液的OD₄₂₀和OD₅₅₀，Na₂CO₃的浓度为1mol/L；5)计算样品和溶剂对照的酶活性，并计算诱导率IR，若IR≥2.0，且具有剂量反应关系时，表明水样样品含有遗传毒性物质，其中，酶活性的计算公式如下：T为显色时间，V为菌体稀释倍数，IR＝水样样品的IU/溶剂对照的IU。