检测清开灵注射液中高分子量物质的凝胶色谱测定方法

摘要

本发明提供一种检测清开灵注射液中高分子量物质的凝胶色谱测定方法，该方法包括下列步骤：a、对照溶液的制备；b、供试品溶液的制备；c、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，以各对照品的分子量的对数与其相应保留时间制得标准曲线的线性回归方程，再由标准曲线回归方程分别计算分子量为10000，5000及1000物质的保留时间，以此为限即可计算供试品在各段的累计峰面积值；d、测量最低检出限；e、检测样品基质干扰的影响；f、模拟试验；g、样品的测定。本发明的方法对清开灵注射液产品中的高分子量物质进行检测，对可能带入的高分子量物质进行有效地监控，具有非常重要的意义。

主权项

检测清开灵注射液中高分子量物质的凝胶色谱测定方法，其特征在于：该方法包括下列步骤：a、对照溶液的制备：取核糖核酸酶A、人胰岛素、胸腺素α、人生长激素释放抑制因子对照品溶液各1ml，置25ml量瓶中，加水稀释并定容至刻度，即得对照品溶液I；再取对照溶液I 2.5ml，定容至25ml，即得对照溶液II；b、供试品溶液的制备：取供试品溶液10ml，至20ml的超滤离心管中，在10000转/min离心15分钟，取残留物加水定容至1ml，即得；c、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，以各对照品的分子量(MW)的对数与其相应保留时间(tR)制得标准曲线的线性回归方程logMW＝a+b tR，再由标准曲线回归方程分别计算分子量为10000，5000及1000物质的保留时间，以此为限即可计算供试品在各段的累计峰面积值；d、测量最低检出限：取对照溶液II分别依次进样25μl、20μl、15μl、10μl、5μl，可发现在进样10μl核糖核酸酶A的峰高与基线噪音的比例约为3∶1，即得最低检出限；e、检测样品基质干扰的影响：分别取对照品溶液II 2ml、3ml、4ml置于5ml量瓶中，用清开灵注射液分别稀释至刻度，依次进样25μl测试，检测样品基质对检测灵敏度的干扰；f、模拟试验：模拟水牛角粉、珍珠母粉的提取工艺，分别在水解2、4、6、8小时取样，检测水解过程中特异蛋白的存在；g、样品的测定：采用供试品溶液的制备方法对10批样品进行检测，注射液的生产工艺控制截取保留相对分子量6000以下的有效物质。