一种高分子冷凝聚法制备萝卜几丁质结合蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种高分子冷凝聚法制备萝卜几丁质结合蛋白的方法，利用PAA+R·CBP→PAA-R·CBP↓和PAA-R·CBP+Ca2+→PAA-Ca2+↓+R·CBP的原理，以萝卜为材料，经诱导、提取、选择性热变性、超过滤浓缩、冷凝反应和置换，提纯获得R·CBP粉。本发明的工艺生产设备投资少，工艺简单，易于实现工业化生产；反应产物PAA-Ca2+可通过使用H2SO4溶液将PAA回收再利用，降低了成本，无环境污染。

主权项

一种高分子冷凝聚法制备萝卜几丁质结合蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)材料：取萝卜洗净，用刀将其表皮砍伤，在16‑20℃下诱导4‑7天，使其染菌，以诱导酶的合成，增加酶含量；2)提取：用5‑10mmol/L NaHCO3水溶液为提取液，取两份等体积的提取液，每份提取液的体积与材料的质量比为1∶1；取一份提取液和材料匀浆，得第一匀浆液，离心，收集第一上清液；再将其残渣和另一份提取液匀浆，得第二匀浆液，离心，收集第二上清液；合并第一上清液和第二上清液；3)选择性热变性：将上述合并的上清液在反应罐内搅拌加热至50‑55℃，并维持4‑6min，然后离心再收集得第三上清液；4)超过滤浓缩：将第三上清液超过滤排除相对分子质量5000以下的可溶性物质，浓缩至原体积的1/3，得浓缩液；5)冷凝反应：于上述浓缩液中，搅拌加入体积与上述浓缩液体积比为0.5％‑0.8％的PAA，加毕转至低温5℃‑10℃下，冷凝反应24小时至48小时，反应式PAA+R·CBP→PAA‑R·CBP↓，得冷凝物，进行离心，得沉淀物PAA‑R·CBP；6)置换：于PAA‑R·CBP中，在搅拌下加入含有80‑120mmol/L CaCl2和5‑10mmol/L NaHCO3的混合溶液，PAA‑R·CBP的质量与混合溶液的体积的比为1∶16‑17，反应式为PAA‑R·CBP+Ca2+→PAA‑Ca2+↓+R·CBP，进行离心，收集第四上清液，冷冻干燥得酶粉，沉淀物为PAA‑Ca2+。