山羊痘病毒复制非必需区的筛选方法及其通用转移载体

摘要

本发明涉及一种山羊痘病毒复制非必需区的筛选方法及其通用转移载体，是通过PCR方法扩增山羊痘病毒基因组某两区域两端基因片段，然后将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(gpt)基因表达盒插入上述片段中，构建2个山羊痘病毒通用转移载体，由上述转移载体获得稳定表达外源基因的重组病毒，从而确定所选区域为山羊痘病毒的复制非必需区，上述通用转移载体含有1个独特的酶切位点Sal I，可插入其它目的基因表达盒。利用本发明提供的两个通用转移载体所获得的重组病毒，不仅具有与亲本病毒相近的生长性能，而且由于基因组中多个毒力相关基因被定向敲除，因此安全性更佳，具备开发成为基因工程减毒疫苗株的潜力。

主权项

一种山羊痘病毒(GTPV)复制非必需区片段的筛选方法，其包括下述步骤：(1)根据病毒基因组某区域两端序列设计引物，以GTPV弱毒疫苗毒株AV41为材料，通过PCR扩增该区域两侧基因组片段分别作为同源重组左侧臂和右侧臂；(2)将两侧重组臂相连，然后在两个重组臂中间插入报告基因和筛选基因的表达盒，构建转移载体质粒；(3)将转移载体质粒与GTPVAV41株共转染原代牛睾丸细胞或者非洲绿猴肾细胞，Vero细胞，然后筛选重组GTPV；(4)通过病毒复制效率证实所选基因组区域为GTPV的复制非必需区。