制备链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的方法

摘要

本发明公开了一种制备链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的方法，通过应用藻胆蛋白alpha亚基裂合酶催化藻蓝胆素与链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类脱辅基蛋白共价结合，制备链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质。本专利发明的方法应用生物过程生产链霉亲和素标记的藻蓝蛋白类alpha亚基荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法。链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质能应用于生物学和医药功能材料领域，特别是应用为生物学和医学检测领域的荧光探针。

主权项

一种制备链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的方法，其特征在于包括下述步骤：(1)采用基因工程方法，将alpha亚基裂合酶基因Anabaena SP.PCC7120中cpcE和cpcF基因克隆于pETDuet‑1中，得到alpha亚基裂合酶表达质粒；(2)用基因工程方法将链霉亲和素基因和藻蓝蛋白alpha亚基类脱辅基蛋白基因M.laminosus sp.PCC7603中CpcA基因克隆于pCOLADeut‑1中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；(3)用基因工程方法将PCB生物合成酶基因hol和pcyA同时克隆于pACYCDuet‑1中，得到PCB生物合成酶质粒；(4)将alpha亚基裂合酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、PCB生物合成酶质粒依次转入大肠杆菌，当这些表达质粒都转入大肠杆菌后，得到相应的大肠杆菌工程菌，应用此大肠杆菌工程菌发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质。