检测乙型肝炎病毒DNA及其G₁₈₉₆A突变的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及野生型和G1896A突变型的乙型肝炎病毒DNA的检测方法和试剂盒，特别是涉及使用锁核酸(LNA，Locked Nucleic Acids)和分子信标探针结合的技术以及实时PCR方法来检测野生型和G1896A突变型的乙型肝炎病毒DNA的方法及用于完成该检测的试剂盒。本发明的方法可以特异且灵敏地检测出临床血液标本中的野生型和G1896A突变型的乙型肝炎病毒DNA。

主权项

一种利用锁核酸和分子信标技术检测野生型及G1896A突变型的乙型肝炎病毒DNA的试剂盒，该试剂盒包括：(1)血液标本中乙型肝炎病毒DNA提取试剂；(2)聚合酶链反应混合液；(3)酶混合液；(4)突变型阳性对照；(5)野生型阳性对照；(6)阴性对照，其中(2)由10×PCR缓冲液、dUTPs、正反向两条引物(SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2)、野生型和突变型分子信标探针(SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4)及MgCl2等组成；(3)由普通Taq酶和UNG酶组成；(4)是经过测序确认过的含G1896A突变的HBV DNA片段的质粒；(5)是经过测序确认过的含1896位点未突变的野生型HBV DNA片段的质粒；(6)是高压灭菌水；其中，用于聚合酶链反应的正向和反向引物序列分别是：5’‑TCCAAGCTGTGCCTTGGGT‑3’(SEQ ID NO：1)5’‑AAGGCAAAAAAGAGAGTAACTCCACA‑3’(SEQ ID NO：2)用于聚合酶链反应的野生型和突变型分子信标探针序列分别是：5’‑FAM‑CAACGCTTTAGGCCATGGACGTTG‑DABCYL‑3’(SEQ I D NO：3)5’‑HEX‑CAACGCTTTGGGCCATGGACGTTG‑DABCYL‑3’(SEQID NO：4)其中下划线标记的碱基是进行了LNA化的。