口蹄疫病毒多重RT-PCR检测试剂盒、其制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种口蹄疫病毒多重RT-PCR检测试剂盒，其制备方法及应用，属于动物疫病检测领域。本发明试剂盒的正链扩增引物由引物1、引物2和引物3所示的核苷酸序列组成；所述的负链扩增引物由引物4、引物5和引物6所示的核苷酸序列组成。多重RT-PCR试剂盒具有较高的敏感性，较常规RT-PCR试剂盒的灵敏度高10～100倍，且具有很好的特异性，即使由于临床样品保存不当或采集时不新鲜时，口蹄疫病毒RNA因各种原因降解断裂，仍可以得到正确的结果，有效解决了病毒含量低微样品不易检出的问题，提高了诊断的可靠性，缩短了检测时间，减少了样品之间交叉污染的机会，检测结果更为准确、可靠。

主权项

一种口蹄疫病毒多重RT‑PCR检测试剂盒，包括彼此独立分装的以下各组分，各组分的用量至少不低于进行一次RT‑PCR反应的用量：RT‑PCR反应缓冲液，dNTP混合物，25mmol/L的MgCl2，反转录酶，RNase抑制子，Taq酶，无RNA酶的双蒸水，正链扩增引物和负链扩增引物，其特征在于：所述的正链扩增引物由以下三种引物组成：引物1：GACTCG/AACGTCTCCC/TGCCAACT，引物2：ACGACG/CGGGGCTTTTGCTTTCAC，引物3：CG/TGGAAACGCAC/TGAGCAGTATC；所述的负链扩增引物由以下三种引物组成：引物4：TGCGG/TACGGCCACC/GTACTACTTC，引物5：AGCTCCACGAA/GAAA/GGTGTCGAG，引物6：CGTGATGTG/AGCG/AAGAATGAAGAA。